实验室常用技术参数资料（二）
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二、常用缓冲液
1．分子克隆常用缓冲液
2．磷酸缓冲液
（1）25℃下0.1mol/L磷酸钾缓冲液的配制※
|
pH |
1mol/L K2 HPO4 (ml) |
1mol/L KH2 PO4 (ml) |
|
5.8 |
8.5 |
91.5 |
|
6.0 |
13.2 |
86.8 |
|
6.2 |
19.2 |
80.8 |
|
6.4 |
27.8 |
72.2 |
|
6.6 |
38.1 |
61.9 |
|
6.8 |
49.7 |
50.3 |
|
7.0 |
61.5 |
38.5 |
|
7.2 |
71.7 |
28.3 |
|
7.4 |
80.2 |
19.8 |
|
7.6 |
86.6 |
13.4 |
|
7.8 |
90.8 |
9.2 |
|
8.0 |
94.0 |
6.2 |
（2）25℃下0.1mol/L磷酸钠缓冲液的配制※
|
pH |
1mol/L Na2 HPO4 (ml) |
1mol/L NaH2 PO4 (ml) |
|
5.8 |
7.9 |
92.1 |
|
6.0 |
12.0 |
88.0 |
|
6.2 |
17.8 |
82.2 |
|
6.4 |
25.5 |
74.5 |
|
6.6 |
35.2 |
64.8 |
|
6.8 |
46.3 |
53.7 |
|
7.0 |
57.7 |
42.3 |
|
7.2 |
68.4 |
31.6 |
|
7.4 |
77.4 |
22.6 |
|
7.6 |
84.5 |
15.5 |
|
7.8 |
89.6 |
10.4 |
|
8.0 |
93.2 |
6.8 |
※:用蒸馏水将混合的两种1mol/L贮存液稀释至1000ml，根据Henderson-Hasselbalch方程计算其pH值：
pH=pK’+1g([质子受体]/[质子供体])
在此，pK’=6.86(25℃)。
3．电泳缓冲液
测序凝胶加样缓冲液
98%去离子甲酰胺
10mol/L EDTA(pH8.0)
0.025%二甲苯青FF
0.025%溴酚蓝
甲酰胺：许多批号的试剂级甲酰胺，其纯度符合使用要求，无须再进行处理。不过，一旦略呈黄色，则应用在磁力搅拌器上将甲酰胺与Dowex XG8 混合床树脂共同搅拌1小时进行去离子处理，并用Whatman 1号滤纸过滤2次，去离子甲酰胺分装成小份，充氮存于-70℃。
常用的电泳缓冲液
|
缓冲液 |
使用液 |
浓贮存液（每升） |
| Tris-乙酸（TAE） | 1×：0.04mol/L Tris-乙酸 | 50×：242g Tris碱 |
| 0.001mol/L EDTA | 57.1ml冰乙酸 | |
| 100ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) | ||
| Tris-磷酸（TPE） | 1×:0.09mol/L Tris-磷酸 | 10×:10g Tris碱 |
| 0.002mol/L EDTA | 15.5ml85%磷酸（1.679g/ml） | |
| 40ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) | ||
| Tris-硼酸（TBE）a | 0.5×0.045mol/L Tris-硼酸 | 5×：54g Tris碱 |
| 0.001mol/L EDTA | 27.5硼酸 | |
| 20ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) | ||
| 碱性缓冲液b | 1×:50mmol/L NaOH | 1×:5ml 10mol/L NaOH |
| 1mmol/L EDTA | 2ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0) | |
| Tris-甘氨酸c | 1×:25mmol/L Tris | 5×:15.1g Tris |
| 250mmol/L 甘氨酸 | 94g 苷氨酸（电泳级）（pH8.3） | |
| 0.1% SDS | 50ml 10% SDS(电泳级) |
说明：
①TBE溶液长时间存放后会形成沉淀物，为避免这一问题，可在室温下用玻璃瓶保存5×溶液，出现沉淀后则予以废弃。
以片都以1×TBE作为使用液（即1：5稀释浓贮液）进行琼脂糖凝胶电泳。但0.5×的使用液已具备足够的缓冲容量。目前几乎所有的琼脂糖胶电泳都以1：10稀释的贮存液作为使用液。
进行聚丙烯酰胺凝胶垂直槽的缓冲液槽较小， 故通过缓冲液的电流量通常较大，需要使用1×TBE以提供足够的缓冲容量。
②碱性电泳缓冲液应现用现配。
③Tris-甘氨酸缓冲液用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。
2×SDS凝胶加样缓冲液：
100mmol/L Tris・HCl(6.8)
200mmol/L二硫苏糖醇（DTT）
4%SDS（电泳级）
0.2%溴酚蓝
20%甘油
不含DTT的2×SDS凝胶加样缓冲液可保存于室温，应在临用前取1mol/L贮存液现加于上述缓冲液中。
4．凝胶加样缓冲液
|
缓冲液类型 |
6×缓冲液 |
贮存温度 |
|
|
0.25%溴酚蓝 |
|
| 0.25%二甲苯青FF | ||
| 40%（W/V）蔗糖水溶液 | ||
|
|
0.25溴酚蓝 |
|
| 0.25%二甲苯青FF | ||
| 15%聚蔗糖(Ficoll400) | ||
|
|
0.25%溴酚蓝 |
|
| 0.25%二甲苯青FF | ||
| 30%甘油水溶液 | ||
|
|
0.25%溴酚蓝 |
|
| 40%(W/V)蔗糖水溶液 | ||
| 碱性加样缓冲液: | ||
| 300mmol/L NaOH | ||
| 6mmol/L EDTA | ||
|
|
18%聚蔗糖(Ficoll400) |
|
| 0.15%溴甲酚绿 | ||
| 0.25%二甲苯青FF |
使用以上凝胶加样缓冲液的目的有三：增大样品密度；以确保DNA均匀进入样品孔内；使样品呈现颜色，从而使加样操作更为便利，含有在电块中能以可预知速率向阳极泳动的染料。溴酚蓝在琼脂糖中移动的速率约为二甲苯青FF的2.2倍，而与琼脂糖浓度无关。以0.5×TBF作电泳液时，溴酚蓝在琼脂糖中的泳动速率约与长300bp的双链线状DNA相同，而二甲苯青FF的泳动则与长4kb的双链线状DNA相同。在琼脂糖浓度为0.5%～1.4%的范围内，这些对应关系受凝胶浓度变化的影响并不显著。
选用哪一种加样染料纯属个人喜恶。但是，对于碱性凝胶应当使用溴甲酚绿作为示踪染料，因为在碱性pH条件下其显色较溴酚更蓝为鲜明。
5．各种pH值的Tris缓冲液的配制
|
各种pH值的Tris缓冲液的配制 |
|
| 所需pH值（25℃） |
0.1mol/L HCl的体积 |
|
7．1 |
45．7 |
|
7．2 |
44．7 |
|
7．3 |
43．4 |
|
7．4 |
42．0 |
|
7．5 |
40．3 |
|
7．6 |
38．5 |
|
7．7 |
36．6 |
|
7．8 |
34．5 |
|
7．9 |
32．0 |
|
8．0 |
29．2 |
|
8.1 |
26.2 |
| 8.2 | 22.9 |
| 8.3 | 19.9 |
| 8.4 | 17.2 |
| 8.5 | 14.7 |
| 8.6 | 12.4 |
| 8.7 | 10.3 |
| 8.8 | 8.5 |
|
8.9 |
7.0 |
某一特定pH值的0.05mol/L Tris缓冲液的配制：将50ml 0.1mol/L Tris碱溶液与上表所示相应体积（单位：ml）的0.1ml/L HCl混合，加水将体积调至100ml
（2）温度对50mmol/L Tris・HCl液pH值的影响
|
4℃ |
25℃ |
37℃ |
|
8．1 |
7．5 |
7．2 |
|
8．2 |
7．6 |
7．3 |
|
8．3 |
7．7 |
7．4 |
|
8．4 |
7．8 |
7．5 |
|
8．5 |
7．9 |
7．6 |
|
8．6 |
8．0 |
7．7 |
|
8．7 |
8．1 |
7．8 |
|
8．8 |
8．2 |
7．9 |
|
8．9 |
8．3 |
8．0 |
|
9．0 |
8．4 |
8．1 |
|
9．1 |
8．5 |
8．2 |
|
9．2 |
8．6 |
8．3 |
|
9．3 |
8．7 |
8．4 |
|
9．4 |
8．8 |
8．5 |
（6）常用缓冲液的pKa值
|
缓冲液 |
分子量 |
pKa值 |
缓冲范围 |
|
Trisa |
12.1 |
8.08 |
7.1～7.9 |
|
HEPESb |
283.3 |
7.47 |
7.2～8.2 |
|
MPOSc |
209.3 |
7.15 |
6.6～7.8 |
|
PIPESd |
304.3 |
6.76 |
6.2～7.3 |
|
MESe |
195.2 |
6.09 |
5.4～6.8 |
a：三羟甲基氨基甲烷；b：N-2-羟乙基哌嗪-N’-2-乙磷酸；c：3-（N-吗啉代）丙磺酸；d：N，N’-双（2-乙磺酸）哌嗪；e：2-（N-吗啉代）乙磺酸。
7．温度对常用缓冲液pH的影响
|
缓冲体系 |
pKa(20℃) |
△pKa/10℃ |
|
Mes |
6.15 |
-0.110 |
|
Ada |
6.60 |
-0.110 |
|
PiPes |
6.80 |
-0.085 |
|
Aces |
6.90 |
-0.200 |
|
Bes |
7.15 |
-0.160 |
|
Mops |
7.20 |
-0.013 |
|
Tes |
7.50 |
-0.200 |
|
Hepes |
7.55 |
-0.014 |
|
Tricine |
8.15 |
-0.210 |
|
Tris |
8.30 |
-0.310 |
|
Bicine |
8.35 |
-0.180 |
|
Glycylglycine |
8.40 |
-0.280 |
三、常用酶的配制
1．溶菌酶
用水配制成50mg/ml的溶菌酶溶液，分装成小份并保存于-20℃。每一小份一经使用后便予丢弃。
2．蛋白水解酶类
| 贮存液 | 贮存温度 | 反应浓度 | 反应缓冲液 | 温度 | 预处理 | |
| 0.01mol/L Tris(pH7.8) | ||||||
| 链霉蛋白酶a | 20mg/ml | -20℃（溶于水） | 1mg/ml | 0.01mol/L EDTA | 37℃ | 自消化b |
| 0.5% SDS | ||||||
| 0.01mol/L Tris(pH7.8) | ||||||
| 蛋白酶Kc | 20mg/ml | -20℃（溶于水） | 50μg/ml | 0.005mol/L EDTA | 37～56℃ | 无须预处理 |
| 0.5% SDS |
a：链霉蛋白酶是从链球菌（Streptomyces griseus）中分离到的一种丝氨酸酶和酸性蛋白酶的混合物。
b：自消化可消除DNA酶和RNA酶的污染，经自消化的链酶蛋白酶的配制方法如下：把该酶的粉末溶解于10mmol./l Tris・HCl(pH7.5)、10mmol/l NaCl中，配成20mg/ml浓度，于37℃温育1h。经消化的链霉蛋白酶分装成小份放在密封试管中，保存-20℃。
c：蛋白酶K是一种枯草蛋白酶类的高活性蛋白酶，从林伯氏白色念球菌（Tritirachium album Limber）中纯化得到。该酶有两个Ca2+ 结合位点，它们离酶的活性中心有一定距离，与催化机理并无直接关系。然而，如果从该酶中除去Ca2+ ，由于出现远程的结构变化，催化活性将丧失80%左右，但其剩余活性通常已足以降解在一般情况下污染酸制品的蛋白质。所以，蛋白酶K消化过程中通常加入EDTA（以抑制依赖于Mg2+ 的核酸酶的作用）。但是，如果要消化对蛋白酶K具有较强耐性的蛋白，如角蛋白一类，则可能需要使用含有1mmol/l Ca2+ 而不含EDTA的缓冲液。在消化完毕后、纯化核酸前要加入EGT（pH8.0）至终浓度为2mmol/L,以鳌合Ca2+ 。
3．无DNA酶的RNA酶
将胰RNA酶（RNA酶A）溶于10mmol/l Tris・HCl(pH7.5)、15mmol/l NaCl中，配成10mg/ml的浓度，于100℃加热15min，缓慢冷却至室温，分装成小份保存于-20℃。
四、常用抗生素溶液
|
|
贮存液a |
工作浓度 |
||
|
浓度 |
保存条件 |
严紧型质粒 |
松弛型质粒 |
|
| 氨苄青霉素 | 50mg/ml(溶于水) |
-20℃ |
20μg/ml |
60μg/ml |
| 羧苄青霉素 | 50mg/ml(溶于水) |
-20℃ |
20μg/ml |
60μg/ml |
| 氯霉素 | 34mg/ml(溶于乙醇) |
-20℃ |
25μg/ml |
170μg/ml |
| 卡那霉素 | 10mg/ml(溶于水) |
-20℃ |
10μg/ml |
50μg/ml |
| 链霉素 | 10mg/ml(溶于水) |
-20℃ |
10μg/ml |
50μg/ml |
| 四环素b | 5mg/ml(溶于乙醇) |
-20℃ |
10μg/ml |
50μg/ml |
a：以水为溶剂的抗生素贮存液通过0.22μm滤器过滤除菌。以乙醇为溶剂的抗生素溶液无须除菌处理。所有抗生素溶液均应放于不透光的容器保存。
b：镁离子是四环素的拮抗剂，四环素抗性菌的筛选应使用不含镁盐的培养基（如LB培养基）。
五、常用贮存液的配制
1．30%丙烯酰胺溶液
【配制方法】
将29g丙烯酰胺和1g N，N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的水中。加热至37℃溶解之，补加水至终体积为100ml。用Nalgene滤器（0.45μm孔径）过滤除菌，查证该溶液的pH值应不大于7.0，置棕色瓶中保存于室温。
【注意】
丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可以通过皮肤吸收，其作用具累积性。称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和面具。可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为它还可能会含有少量未聚合材料。
一些价格较低的丙烯酰胺和双丙烯酰胺通常含有一些金属离子，在丙烯酰胺贮存液中加入大约0.2体积的单床混合树脂（MB-1Mallinckrodt），搅拌过夜，然后用Whatman 1号滤纸过滤以纯化之。
在贮存期间，丙烯酰胺和双丙烯酰胺会缓慢转化成丙烯酰和双丙烯酸。
2．40%丙烯酰胺
【配制方法】
把380g丙烯酰胺（DNA测序级）和20g N，N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为600ml的蒸馏水中。继续按上述配制30%丙烯酰胺溶液的方法处理，但加热溶解后应以蒸馏水补足至终体积为1L。
【注意】
见上述配制30%丙烯酰胺的说明，40%丙烯酰胺溶液用于DNA序列测定。
3．放线菌素D溶液
【配制方法】
把20mg放线菌素D溶解于4ml 100%乙醇中，1：10稀释贮存液，用100%乙醇作空白对照读取OD440 值。放线菌素D（分子量为1255）纯品在水溶液中的摩尔消化系数为21，900，故而1mg/ml的放线菌素D溶液在440nm处的吸光值为0.182，放线菌素D的贮存液应放在包有箔片的试管中，保存于-20℃。
【注意】
放线菌素D是致畸剂和致癌剂，配制该溶液时必须戴手套并在通风橱内操作，而不能在开放在实验桌面上进行，谨防吸入药粉或让其接触到眼睛或皮肤。
药厂提供的作治疗用途的放线菌素D制品常含有糖或盐等添加剂。只要通过测量贮存液在440nm波长处的光吸收确定放线菌素D的浓度，这类制品便可用于抑制自身引导作用。
4．0.1mol/L腺苷三磷酸（ATP）溶液
【配制方法】
在0.8ml水中溶解60mg ATP,用0.1mol/L NaOH调至pH值至7.0，用蒸馏水定容1ml，分装成小份保存于-70℃
5．10mol/L乙酸酰溶液
【配制方法】
把770g乙酸酰溶解于800ml水中，加水定容至1L后过滤除菌。
6．10%过硫酸铵溶液
【配制方法】
把1g过硫酸铵溶解于终量为10ml的水溶液中，该溶液可在4℃保存数周。
7．BCIP溶液
【配制方法】
把0.5g的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸二钠盐（BCIP）溶解于10ml 100%的二甲基甲酰胺中，保存于4℃
8．2×BES缓冲盐溶液
【配制方法】
用总体积90ml的蒸馏水溶解1.07g盐溶液BES[N，N-双（2-羟乙基）-2-氨基乙磺酸]、1.6g NaCl和0.027g Na2 HPO4 ，室温下用HCl调节 该溶液的pH值至6.96、然后加入蒸馏水定容至100ml，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成小份，保存于-20℃。
9．1mol/L CaCl2 溶液
【配制方法】
在200ml蒸馏水中溶解54g CaCl2 ・6H2 O，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成10ml小份贮存于-20℃。
【注意】
制备感受态细胞时，取出一小份解冻并用蒸馏水稀释至100ml，用Nalgene滤器（0.45μm孔径）过滤除菌，然后骤冷至0℃。
10．2.5mol/L CaCl2 溶液
【配制方法】
在20ml蒸馏水中溶解13.5g CaCl2 ・6H2 O，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于-20℃。
11．1mol/L二硫苏糖醇（DTT）溶液
【配制方法】
用20ml 0.01mol/L乙酸钠溶液（pH5.2）溶解3.09g DTT，过滤除菌后分装成1ml小份贮存于-20℃。
【注意】
DTT或含有DTT的溶液不能进行高压处理。
12．脱氧核苷三磷酸（dNTP）溶液
【配制方法】
把每一种dNTP溶解于水至浓度各为100mmol/L左右，用微量移液器吸取0.05mol/l Tris碱分别调节 每一dNTP溶液的pH值7.0（用pH试纸检测），把中和后的每种dNTP溶液各取一份作适当稀释，在下表中给出的波长下读取光密度计算出每种dNTP的实际浓度，然后用水稀释成终浓度为50mmol/L的dNTP，分装成小份贮存于-70℃。
|
碱基 |
波长（nm） |
消化系数（ε）[L/（mol・cm）] |
|
A |
259 |
1.54×104 |
|
G |
253 |
1.37×104 |
|
C |
271 |
9.10×103 |
|
T |
260 |
7.40×103 |
比色杯光径为1cm时,吸光度=εM
13．0.5mol/l EDTA(pH8.0)溶液
【配制方法】
在800ml水中加入186.1g二水乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na・2H2 O），在磁力搅拌器上剧烈搅拌，用NaOH调节 溶液的pH值至8.0（约需20g NaOH颗粒）然后定容至1L，分装后高压灭菌备用。
【注意】
EDTA二钠盐需加入NaOH将溶液的pH值调至接近8.0，才能完全溶解。
14．溴化乙锭（10mg/ml溶液）
【配制方法】
在100ml水中加入1g溴化乙锭，磁力搅拌数小时以确保其完全溶解，然后用铝箔包裹容器或转移至棕色瓶中，保存于室温。
【注意】
小心：溴化乙锭是强诱变剂并有中度毒性，使用含有这种染料的溶液时务必戴上手套，称量染料时要戴面罩。
15．2×HEPES缓冲盐溶液
【配制方法】
用总量为90ml的蒸馏水溶解1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2 PO4 ・2H2 O、0.2g葡聚糖和1gHEPES，用0.5mol/l NaOH调节 pH值至7.05，再用蒸馏水定容至100ml。用0.22μm滤器过滤除菌，分装成5ml小份，贮存于-20℃。
16．IPTG溶液
【配制方法】
IPTG为异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（分子量为238.3），在8ml蒸馏水中溶解2g IPTG后，用蒸馏水定容至10ml，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于-20℃。
17．1mol/L乙酸镁溶液
【配制方法】
在800ml水中溶解214.46g四水乙酸镁，用水定容至1L过滤除菌。
18．1mol/L MgCl2 溶液
【配制方法】
在800ml水中溶解203.4g MgCl2 ・6H2 O，用水定容至1L，分装成小份并高压灭菌备用。
【注意】
MgCl2 极易潮解，应选购小瓶（如100g）试剂，启用新瓶后勿长期存放。
19．β-巯基乙醇（BME）溶液
【配制方法】
一般得到的是14.4mol/L溶液，应装在棕色瓶中保存于4℃。
【注意】
BME或含有BME的溶液不能高压处理。
20．NBT溶液
【配制方法】
把0.5g氯化氮蓝四唑溶解于10ml 70%的二甲基甲酰胺中，保存于4℃。
21．酚/氯仿溶液
【配制方法】
把酚和氯仿等体积混合后用0.1mol/L Tris・HCl(pH7.6)抽提几次以平衡这一混合物，置棕色玻璃瓶中，上面覆盖等体积的0.01mol/l Tris・HCl(pH7.6)液层，保存于4℃。
【注意】
酚腐蚀性很强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜，穿防护服。所有操作均应在化学通风橱中进行。与酚接触过的部位皮肤应用大量的水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。
22．10mmol/L苯甲基磺酰氟（PMSF）溶液
【配制方法】
用异丙醇溶解PMSF成1.74mg/ml（10mmol/L），分装成小份贮存于-20℃。如有必要可配成浓度高达17.4mg/ml的贮存液（100mmol/L）。
【注意】
PMSF严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。一旦眼睛或皮肤接触了PMSF，应立即用大量水冲洗之。凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。
PMSF在水溶液中不稳定。应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中。PMSF在水溶液中的活性丧失速率随pH值的升高而加快，且25℃的失活速率高于4℃。pH值为8.0时，20μmmol/l PMSF水溶液的半寿期大约为85min，这表明将PMSF溶液调节 为碱性（pH>8.6）并在室温放置数小时后，可安全地予以丢弃。
23．磷酸盐缓冲溶液（PBS）溶液
【配制方法】
在800ml蒸馏水中溶解8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2 HPO4 和0.24g KH2 PO4 ,用HCl调节 溶液的pH值至7.4加水定容至1L，在15lbf/in2 (1034×105 Pa)高压下蒸气灭菌20min。保存于室温。
24．1mol/L乙酸钾（pH7.5）溶液
【配制方法】
将9.82g乙酸钾溶解于90ml纯水中，用2mol/L乙酸调节 pH值至7.5后加入纯水定容到1L，保存于-20℃。
25．乙酸钾溶液（用于碱裂解）
【配制方法】
在60ml 5mol/L乙酸钾溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml水，即成钾浓度为3mol/L而乙酸根浓度为5mol/L的溶液。
26．3mol/L乙酸钠（pH5.2和pH7.0）溶液
【配制方法】
在80ml水中溶解408.1g三水乙酸钠，用冰乙酸调节 pH值至5.2或用稀乙酸调节 pH值至7.0，加水定容到1L，分装后高压灭菌。
27．5mol/L NaCl溶液
【配制方法】
在800ml水中溶解292.2g NaCl加水定容至1L，分装后高压灭菌。
28．10%十二烷基硫酸钠（SDS）溶液
【配制方法】
在900ml水中溶解100g电泳级SDS，加热至68℃助溶，加入几滴浓盐酸调节 溶液的pH值至7.2，加水定容至1L，分装备用。
【注意】
SDS的微细晶粒易扩散，因此称量时要戴面罩，称量完毕后要清除残留在称量工作区和天平上的SDS，10%SDS溶液无须灭菌。
29．20×SSC溶液
【配制方法】
在800ml水中溶解175.3g NaCl和88.2g柠檬酸钠，加入数滴10mol/l NaOH溶液调节 pH值至7.0，加水定容至1L，分装后高压灭菌。
30．20×SSPE溶液
【配制方法】
在800ml水中溶解17.5g NaCl、27.6g NaH2 PO4 ・H2 O和7.4g EDTA，用NaOH溶液调节 pH值至7.4（约需6.5ml 10ml/L NaOH），加水定容至1L，分装后高压灭菌。
31．100%三氯乙酸溶液
【配制方法】
在装有500g TCA的瓶中加入227ml水，形成的溶液含有100%（M/V）TCA。
32．1mol/L Tris溶液
【配制方法】
在800ml水中溶解121.91g Tris碱，加入浓HCl调节 pH值至所需值。
pH HCl
7.4 70ml
7.6 60ml
8.0 42ml
应使溶液冷至室温后方可最后调定pH值，加水定容至1L，分装后高压灭菌。
【注意】
如1mol/L溶液呈现黄色，应予丢弃并置备质量更好的Tris。
尽管多种类型的电极均不能准确测量Tris溶液的pH值，但仍可向大多数厂商购得合适的电极。
Tris溶液的pH值因温度而异，温度每升高1℃，pH值大约降低0.03个单位。例如：0.05mol/L的溶液在5℃、25℃、和37℃时的pH值分别为9.5、8.9和8.6。
33．Tris缓冲盐溶液（TBS）（25mmol/l Tris）
【配制方法】
在800ml蒸馏水中溶解8g NaCl、0.2g KCl和3g Tris碱，加入0.015g酚并用HCl调至pH值至7.4，用蒸馏水定容至1L，分装后在151bf/in2(1.034×105 Pa)高压下蒸汽灭菌20min，于室温保存。
34．X-gal溶液
【配制方法】
X-gal为5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D半乳糖苷。用二基甲酰胺溶解X-gal配制成的20mg/ml的贮存液。保存于一玻璃管或聚丙烯管中，装有X-gal溶液的试管须用铝箔封裹以防因受光照而被破坏，并应贮存于-20℃。X-gal溶液无须过滤除菌。
杂交试验中用于降低背景的封闭剂
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试剂 |
用途 |
| Denhardt试剂 | Northern杂交 |
| 使用RNA探针的杂交 | |
| 单拷贝序列的Southern杂交 | |
| 将DNA固定于尼龙膜上的杂交 | |
| Denhardt试剂通常配制50×贮存液，过滤后保存于-20℃。可将该贮存液10倍稀释于预杂交液（常为含有0.5%SDS和100μg/ml经变性被打断的鲑精DNA的6×SSC或6×SSPE）中。50×Denhardt液中含5g聚蔗糖（Ficoll,400型，Pharmacia）、5g聚乙烯吡咯烷酮和5g牛血清白蛋白（组分V”Sigmal），加水至终体积为500ml。 | |
| BLOTTO | Grunstein-Hogness杂交 |
| Benton-Davis杂交 | |
| 除单拷贝序列Southern杂交以外的所有Southern杂交 | |
| 斑点印迹 | |
| 1×BLOTT（牛乳转移技术优化液，Bovine Lacto Transfer Technique Optimizer）,是含5%胶脂奶粉和0.02%叠氮钠的水溶液，应保存于4℃。使用前可用预杂交液稀释25倍。BLOTTO不应与高浓度的SDS并用，因为后者会导致牛奶中蛋白质析出。如果杂交背景不合要求，可在杂交液中加入NP-40至终浓度为1%。BLOTTO不能用作Northern杂交的封闭剂，因为这一封闭剂中可能含有RNA酶，其活性之高使人无法接受。 | |
| 注意：叠氮钠有毒性，取用时需戴手套小心操作。含叠氮钠的溶液应予明确标记。 | |
| 肝素 | Southern杂交 |
| 原位杂交 | |
| 肝素（Sigma H-7005，从猪中提取的二级产品或相当等级的产品）用4×SSPE或4×SSC溶解配制成50mg/ml的浓度，保存于4℃。肝素在含有葡聚糖硫酸酯的杂交液中用作封闭剂的浓度为500μg/ml，在不含葡聚糖硫酸酯的杂交液中的浓度为50μg/ml。 | |
| 经变性并被打断的鲑精DNA | southern和Northern杂交 |
| 把鲑鱼精子DNA（Sigma,Ⅲ,盐钠）溶解于水配制成10mg/ml的浓度，必要时于室温磁力搅拌2～4h助溶。把溶液中NaCl的浓度调至0.1mol/L，并用酚和酚/氯仿各抽提一次，回收水相。合DNA溶液快速通17号皮下注射针头12次，以剪切DNA。加入2倍体积用冰预冷的乙醇沉淀DNA。离心回收DNA并重溶于水，配制成10mg/ml的浓度，测定溶液的OD260 值并计算出精确的DNA浓度，然后煮沸10min，分装成小份保存于-20℃。使用前置沸水浴中加热5min，然后迅速在冰浴中骤冷。预杂交液中应含有100μg/ml经变性并被打断的鲑鱼精子DNA |
