小鼠(T)酶联免疫分析(ELISA)
互联网
小鼠(T) 酶联免疫 分析( ELISA )
试剂 盒使用说明书
本试剂仅供研究使用 目的:本试剂盒用于测定小鼠血清,血浆及相关液体样本中*~AT~B含量。
实验原理 :
本试剂盒应用双抗体夹心法测定 标本 中 小鼠*~Kfont~M~AT~B~K~Hfont~M_~K~Hspan~M_~Kspan~M水平。用纯化的 小鼠*~Kfont~M~AT~B~K~Hfont~M_~K~Hspan~M_~Kspan~M抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入 HRP 标记的*~K~Hfont~M_~Kfont~M~AT~B~K~Hfont~M_~Kfont~M抗体结合,形成抗体 - 抗原 - 酶标抗体复合物 ,经过彻底洗涤后 加 底物TMB 显色。 TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 450 nm波长下测定吸光度( OD 值), 通过标准曲线 计算样品 中小鼠*~Kfont~M~AT~B~K~Hfont~M_~K~Hspan~M_~Kspan~M浓度。
试剂盒组成 :
试剂盒组成 |
48孔配置 |
96孔配置 |
保存 |
说明书 |
1份 |
1份 |
|
封板膜 |
2片( 48 ) |
2片( 96 ) |
|
密封袋 |
1个 |
1个 |
|
酶标包被板 |
1 ×48 |
1 ×96 |
2-8℃保存 |
标准品:180 ng/L |
0.5ml× 1 瓶 |
0.5ml× 1 瓶 |
2-8℃保存 |
标准品稀释液 |
1.5ml× 1 瓶 |
1.5ml× 1 瓶 |
2-8℃保存 |
酶标试剂 |
3 ml× 1 瓶 |
6 ml× 1 瓶 |
2-8℃保存 |
样品稀释液 |
3 ml× 1 瓶 |
6 ml× 1 瓶 |
2-8℃保存 |
显色剂A 液 |
3 ml× 1 瓶 |
6 ml× 1 瓶 |
2-8℃保存 |
显色剂B 液 |
3 ml× 1 瓶 |
6 ml× 1 瓶 |
2-8℃保存 |
终止液 |
3ml× 1 瓶 |
6ml× 1 瓶 |
2-8℃保存 |
浓缩洗涤液 |
(20ml × 20 倍)× 1 瓶 |
(20ml × 30 倍)× 1 瓶 |
2-8℃保存 |
样本处理及要求 :
1.血清:室温血液自然凝固 10-20 分钟,离心 20 分钟左右( 2000-3000 转 / 分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
2.血浆:应根据标本的要求选择 EDTA 、者柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合 10-20 分钟后,离心 20 分钟左右( 2000-3000 转 / 分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
3.尿液:用无菌管收集,离心 20 分钟左右( 2000-3000 转 / 分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4.细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心 20 分钟左右( 2000-3000 转 / 分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用 PBS ( PH7.2-7.4 )稀释细胞悬液,细胞浓度达到 100 万 /ml 左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心 20 分钟左右( 2000-3000 转 / 分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
5.组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的 PBS , PH7.4 。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持 2-8 ℃的温度。加入一定量的 PBS ( PH7.4 ),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心 20 分钟左右( 2000-3000 转 / 分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
操作步骤
1. 标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10 孔,在第一、第二孔中分别加标准品 100 μ l,然后在第一、第二孔中加标准品稀释液 50 μ l,混匀;然后从第一孔、第二孔中各取 100 μ l分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液 50 μ l,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取 50 μ l弃掉,再各取 50 μ l分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液 50ul ,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取 50 μ l分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液 50 μ l,混匀后从第七、第八孔中分别取 50 μ l加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液 50 μ l,混匀后从第九第十孔中各取 50 μ l弃掉。(稀释后各孔加样量都为 50 μ l,浓度分别为 120 ng/L ,80 ng/L ,40 ng/L ,20 ng/L L ,10 ng/L )。
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、 待测样品孔 。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40 μ l,然后再加待测样品 10 μ l(样品最终稀释度为 5 倍)。 加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁, 轻轻 <SPAN style="FONT-SIZE: 10.5pt; FONT-FAMILY: '宋体'; mso-space, , r