小鼠(T)酶联免疫分析（ELISA）

互联网2013-09-05

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小鼠(T) 酶联免疫分析（ ELISA ）

试剂盒使用说明书

本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清，血浆及相关液体样本中*~AT~B含量。

实验原理：

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠*~8lt~Jfont~8gt~J~AT~B~8lt~J~Hfont~8gt~J_~K~Hspan~M_~Kspan~M水平。用纯化的小鼠*~8lt~Jfont~8gt~J~AT~B~8lt~J~Hfont~8gt~J_~K~Hspan~M_~Kspan~M抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。 TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 450 nm波长下测定吸光度（ OD 值）， 通过标准曲线计算样品中小鼠*~8lt~Jfont~8gt~J~AT~B~8lt~J~Hfont~8gt~J_~K~Hspan~M_~Kspan~M浓度。

试剂盒组成：

试剂盒组成	48<font>孔配置</font>	96<font>孔配置</font>	保存
说明书	1<font>份</font>	1<font>份</font>
封板膜	2<font>片（</font> <font>48</font> <font>）</font>	2<font>片（</font> <font>96</font> <font>）</font>
密封袋	1<font>个</font>	1<font>个</font>
酶标包被板	1 ×<font>48</font>	1 ×<font>96</font>	2-8<font>℃保存</font>
标准品：<font>180</font> ng/L	0.5ml<font>×</font> <font>1</font> <font>瓶</font>	0.5ml<font>×</font> <font>1</font> <font>瓶</font>	2-8<font>℃保存</font>
标准品稀释液	1.5ml<font>×</font> <font>1</font> <font>瓶</font>	1.5ml<font>×</font> <font>1</font> <font>瓶</font>	2-8<font>℃保存</font>
酶标试剂	3 ml<font>×</font> <font>1</font> <font>瓶</font>	6 ml<font>×</font> <font>1</font> <font>瓶</font>	2-8<font>℃保存</font>
样品稀释液	3 ml<font>×</font> <font>1</font> <font>瓶</font>	6 ml<font>×</font> <font>1</font> <font>瓶</font>	2-8<font>℃保存</font>
显色剂<font>A</font> <font>液</font>	3 ml<font>×</font> <font>1</font> <font>瓶</font>	6 ml<font>×</font> <font>1</font> <font>瓶</font>	2-8<font>℃保存</font>
显色剂<font>B</font> <font>液</font>	3 ml<font>×</font> <font>1</font> <font>瓶</font>	6 ml<font>×</font> <font>1</font> <font>瓶</font>	2-8<font>℃保存</font>
终止液	3ml<font>×</font> <font>1</font> <font>瓶</font>	6ml<font>×</font> <font>1</font> <font>瓶</font>	2-8<font>℃保存</font>
浓缩洗涤液	（<font>20ml</font> <font>×</font> <font>20</font> <font>倍）×</font> <font>1</font> <font>瓶</font>	（<font>20ml</font> <font>×</font> <font>30</font> <font>倍）×</font> <font>1</font> <font>瓶</font>	2-8<font>℃保存</font>

样本处理及要求：

1.血清：室温血液自然凝固 10-20 分钟，离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2.血浆：应根据标本的要求选择 EDTA 、者柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合 10-20 分钟后，离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

3.尿液：用无菌管收集，离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用 PBS （ PH7.2-7.4 ）稀释细胞悬液，细胞浓度达到 100 万 /ml 左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

5.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的 PBS ， PH7.4 。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持 2-8 ℃的温度。加入一定量的 PBS （ PH7.4 ），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

操作步骤

1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10 孔，在第一、第二孔中分别加标准品 100 μ l，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液 50 μ l，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取 100 μ l分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液 50 μ l，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取 50 μ l弃掉，再各取 50 μ l分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液 50ul ，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取 50 μ l分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液 50 μ l，混匀后从第七、第八孔中分别取 50 μ l加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液 50 μ l，混匀后从第九第十孔中各取 50 μ l弃掉。（稀释后各孔加样量都为 50 μ l，浓度分别为 120 ng/L ，80 ng/L ，40 ng/L ，20 ng/L L ，10 ng/L ）。

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40 μ l，然后再加待测样品 10 μ l（样品最终稀释度为 5 倍）。 加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻 <SPAN style="FONT-SIZE: 10.5pt; FONT-FAMILY: '宋体'; mso-space, , r