小鼠酶联免疫分析(ELISA)
互联网
小鼠 酶联免疫 分析( ELISA )
试剂 盒使用说明书
本试剂仅供研究使用 目的:本试剂盒用于测定小鼠血清,血浆及相关液体样本中 (Insulin) 含量。
实验原理 :
本试剂盒应用 双抗体 夹心法测定 标本 中 小鼠胰岛素<font>(Insulin)</font> 水平。用纯化的 小鼠胰岛素<font>(Insulin)</font> <font>抗体</font> 包被微孔板,制成固相 抗 体,往包被 单抗 的微孔中依次加入 胰岛素<font>(Insulin)</font> ,再与<font>HRP</font> <font>标记的</font> 胰岛素<font>(Insulin)</font> <font>抗体</font> 结合,形成抗体<font>-</font> <font>抗原</font> <font>-</font> <font>酶标抗体复合物</font> ,经过彻底洗涤后 加 底物<font>TMB</font> <font>显色。</font> <font>TMB</font> <font>在</font> HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 胰岛素<font>(Insulin)</font> 呈正相关。用酶标仪在 450 nm<font>波长下测定吸光度(</font> <font>OD</font> <font>值),</font> 通过标准曲线 计算样品 中 小鼠胰岛素<font>(Insulin)</font> 含量 。
试剂盒组成 :
试剂盒组成 |
48<font>孔配置</font> |
96<font>孔配置</font> |
保存 |
说明书 |
1<font>份</font> |
1<font>份</font> |
|
封板膜 |
2<font>片(</font> <font>48</font> <font>)</font> |
2<font>片(</font> <font>96</font> <font>)</font> |
|
密封袋 |
1<font>个</font> |
1<font>个</font> |
|
酶标包被板 |
1 ×<font>48</font> |
1 ×<font>96</font> |
2-8<font>℃保存</font> |
标准品: 1800pg/ml |
0.5ml<font>×</font> <font>1</font> <font>瓶</font> |
0.5ml<font>×</font> <font>1</font> <font>瓶</font> |
2-8<font>℃保存</font> |
标准品稀释液 |
1.5ml<font>×</font> <font>1</font> <font>瓶</font> |
1.5ml<font>×</font> <font>1</font> <font>瓶</font> |
2-8<font>℃保存</font> |
酶标试剂 |
3 ml<font>×</font> <font>1</font> <font>瓶</font> |
6 ml<font>×</font> <font>1</font> <font>瓶</font> |
2-8<font>℃保存</font> |
样品稀释液 |
3 ml<font>×</font> <font>1</font> <font>瓶</font> |
6 ml<font>×</font> <font>1</font> <font>瓶</font> |
2-8<font>℃保存</font> |
显色剂<font>A</font> <font>液</font> |
3 ml<font>×</font> <font>1</font> <font>瓶</font> |
6 ml<font>×</font> <font>1</font> <font>瓶</font> |
2-8<font>℃保存</font> |
显色剂<font>B</font> <font>液</font> |
3 ml<font>×</font> <font>1</font> <font>瓶</font> |
6 ml<font>×</font> <font>1</font> <font>瓶</font> |
2-8<font>℃保存</font> |
终止液 |
3ml<font>×</font> <font>1</font> <font>瓶</font> |
6ml<font>×</font> <font>1</font> <font>瓶</font> |
2-8<font>℃保存</font> |
浓缩洗涤液 |
(<font>20ml</font> <font>×</font> <font>20</font> <font>倍)×</font> <font>1</font> <font>瓶</font> |
(<font>20ml</font> <font>×</font> <font>30</font> <font>倍)×</font> <font>1</font> <font>瓶</font> |
2-8<font>℃保存</font> |
样本处理及要求 :
1. <font>血清:室温血液自然凝固</font> <font>10-20</font> <font>分钟,离心</font> <font>20</font> <font>分钟左右(</font> <font>2000-3000</font> <font>转</font> <font>/</font> <font>分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。</font>
2. <font>血浆:应根据标本的要求选择</font> <font>EDTA</font> <font>、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合</font> <font>10-20</font> <font>分钟后,离心</font> <font>20</font> <font>分钟左右(</font> <font>2000-3000</font> <font>转</font> <font>/</font> <font>分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。</font>
3. <font>尿液:用无菌管收集,离心</font> <font>20</font> <font>分钟左右(</font> <font>2000-3000</font> <font>转</font> <font>/</font> <font>分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。</font>
4. <font>细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心</font> <font>20</font> <font>分钟左右(</font> <font>2000-3000</font> <font>转</font> <font>/</font> <font>分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用</font> <font>PBS</font> <font>(</font> <font>PH7.2-7.4</font> <font>)稀释细胞悬液,细胞浓度达到</font> <font>100</font> <font>万</font> <font>/ml</font> <font>左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心</font> <font>20</font> <font>分钟左右(</font> <font>2000-3000</font> <font>转</font> <font>/</font> <font>分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。</font>
5. <font>组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的</font> <font>PBS</font> <font>,</font> <font>PH7.4</font> <font>。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持</font> <font>2-8</font> <font>℃的温度。加入一定量的</font> <font>PBS</font> <font>(</font> <font>PH7.4</font> <font>),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心</font> <font>20</font> <font>分钟左右(</font> <font>2000-3000</font> <font>转</font> <font>/</font> <font>分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。</font>
6. <font>标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可</font> 将标本放于 -20 ℃保存,但 应 避免反复冻融 .
7. 不能检测含NaN3的样品 ,因<font>NaN3</font> <font>抑制辣根过氧化物酶的(</font> <font>HRP</font> <font>)活性。</font>
操作步骤
1. 标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔<font>10</font> <font>孔,在第一、第二孔中分别加标准品</font> <font>100</font> μ l<font>,然后在第一、第二孔中加标准品稀释液</font> <font>50</font> μ l<font>,混匀;然后从第一孔、第二孔中各取</font> <font>100</font> μ l<font>分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液</font> <font>50</font> μ l<font>,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取</font> <font>50</font> μ l<font>弃掉,再各取</font> <font>50</font> μ l<font>分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液</font> <font>50ul</font> <font>,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取</font> <font>50</font> μ l<font>分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液</font> <font>50</font> μ l<font>,混匀后从第七、第八孔中分别取</font> <font>50</font> <SPAN style="FONT-SIZE: 10.5pt; FONT-FAMI