小鼠酶联免疫分析（ELISA）

 

小鼠 酶联免疫 分析（ ELISA ）

试剂 盒使用说明书

本试剂仅供研究使用          目的：本试剂盒用于测定小鼠血清，血浆及相关液体样本中 (Insulin) 含量。

实验原理 ：

   本试剂盒应用 双抗体 夹心法测定 标本 中 小鼠胰岛素(Insulin) 水平。用纯化的 小鼠胰岛素(Insulin) 抗体 包被微孔板，制成固相 抗 体，往包被 单抗 的微孔中依次加入 胰岛素(Insulin) ，再与HRP 标记的 胰岛素(Insulin) 抗体 结合，形成抗体- 抗原 - 酶标抗体复合物 ，经过彻底洗涤后 加 底物TMB 显色。 TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 胰岛素(Insulin) 呈正相关。用酶标仪在 450 nm波长下测定吸光度（ OD 值）， 通过标准曲线 计算样品 中 小鼠胰岛素(Insulin) 含量 。

试剂盒组成 ：

试剂盒组成	48孔配置	96孔配置	保存
说明书	1份	1份
封板膜	2片（ 48 ）	2片（ 96 ）
密封袋	1个	1个
酶标包被板	1 ×48	1 ×96	2-8℃保存
标准品： 1800pg/ml	0.5ml× 1 瓶	0.5ml× 1 瓶	2-8℃保存
标准品稀释液	1.5ml× 1 瓶	1.5ml× 1 瓶	2-8℃保存
酶标试剂	3 ml× 1 瓶	6 ml× 1 瓶	2-8℃保存
样品稀释液	3 ml× 1 瓶	6 ml× 1 瓶	2-8℃保存
显色剂A 液	3 ml× 1 瓶	6 ml× 1 瓶	2-8℃保存
显色剂B 液	3 ml× 1 瓶	6 ml× 1 瓶	2-8℃保存
终止液	3ml× 1 瓶	6ml× 1 瓶	2-8℃保存
浓缩洗涤液	（20ml × 20 倍）× 1 瓶	（20ml × 30 倍）× 1 瓶	2-8℃保存

 

样本处理及要求 ：

1. 血清：室温血液自然凝固 10-20 分钟，离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2. 血浆：应根据标本的要求选择 EDTA 、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合 10-20 分钟后，离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

3. 尿液：用无菌管收集，离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用 PBS （ PH7.2-7.4 ）稀释细胞悬液，细胞浓度达到 100 万 /ml 左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的 PBS ， PH7.4 。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持 2-8 ℃的温度。加入一定量的 PBS （ PH7.4 ），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可 将标本放于 -20 ℃保存，但 应 避免反复冻融 .

7.  不能检测含NaN3的样品 ，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（ HRP ）活性。

操作步骤

1.  标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10 孔，在第一、第二孔中分别加标准品 100 μ l，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液 50 μ l，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取 100 μ l分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液 50 μ l，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取 50 μ l弃掉，再各取 50 μ l分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液 50ul ，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取 50 μ l分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液 50 μ l，混匀后从第七、第八孔中分别取 50 <SPAN style="FONT-SIZE: 10.5pt; FONT-FAMI