革兰氏染色
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一、目的和要求
1.了解革兰氏染色法原理及其在细菌 分类鉴定中的重要性。
2.掌握革兰氏染色的基本步骤。
二、原理
G+、G-细菌的细胞壁成分和结构不同。G+的CW主要有肽聚糖形成的网状结构组成,在染色过程中,当用95%乙醇处理时,由于脱水而引起网状结构中的孔径变小,CW通透性降低,使结晶紫-碘复合物被保留在CW内而不易脱色,因此呈蓝紫色。G-的CW中肽聚糖含量低,脂类物质含量高,当用乙醇处理时,脂类物质溶解,CW的通透性增加,使结晶紫-碘复合物容易被乙醇抽提出来而脱色,然后又被染上了复染剂的颜色,因此呈现红色。
三、 菌种:大肠杆菌 、金黄色葡萄球菌
染液:革兰氏染液
四、操作
具体步骤
制片——固定——初染(结晶紫染液)1-2min——水洗——媒染(碘液)1min——水洗——脱色(95%乙醇至无色——水洗——复染(番红或复红染液)1-2min——水洗——干燥——镜检
革兰氏染色的关键环节
涂片不宜过厚,以免脱色不完全,造成假阳性。
乙醇脱色时间
菌龄:应选择活跃生长期的幼培养物作革兰氏染色。培养时间过长,或死亡及部分自溶,改变了细菌CW的通透性,造成阳性菌的假阴性反应。
火焰固定不宜过热
媒染剂的作用
媒染剂的作用是增加染料和细胞之间的亲和性或吸附力,即以某种方式帮助染料固定在细胞上,使之不易脱落。
五、实验报告
简述各菌株的染色结果,并分别绘图示其形态特征。
六、预习
细菌的芽孢染色法