植物样品的采取、处理与保存
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从大田或实验田采回的样品,一般数量较大,称为“原始样品”。再按原始样品的种类(如根、茎、叶、花、果实等)分别选出“平均样品”。再根据分析任务的要求和样品的特征,从平均样品中选出供分析用的“分析样品”。由此可见,分析样品的获得须经一系列复杂而仔细的步骤,在实际工作中一定要以高度认真负责的态度对待。
(一)原始样品及平均样品的采取、处理与保存
原始样品及平均样品的采取,按分析目的可有两种方法:一种是为了鉴定品质而进行的混合取样;另一种是按植物 生育期取样。
1.混合取样法:一般种子样品可用混合取样法。把代表一定面积的收获物先经脱粒,然后在木板或牛皮纸上铺成均匀的一层,再按对角线把样品分成4 个三角形,取两个相对的三角形的样品,而将另外两个三角形的样品淘汰。如此操作,一直淘汰至所要求的数量为止。这个取样法叫做“四分法”,这样取得的平均样品在实验室经适当处理即可制成分析样品。
豆类及油料种子选取平均样品的方法与谷类种子取样法相同。注意,样品中不要有未成熟的种子或混杂物,不要将簸出去的种子加到平均样品中。
如果直接从田里采取植株样品,在生长均一的情况下,可按对角线或沿平行的直线等距离采样。如果植株长势不均匀,则应根据生长的强弱,按比例采取大约5 个点的样品后混合。每个样点取的植株数随植物的种类和采样的时间有所不同。如小麦等密植型作物或其它作物幼苗,可按面积采取或采取样品束(一束样品的植株数视需要而定),象玉米、甘蔗等作物,每个样点采取一株就够了。
选取甘薯、马铃薯、甜菜、萝卜等块根、块茎的平均样品时,必须注意到大、中、小三类样品的比例。然后纵切取其一部分(二分之一至四分之一)组织作为平均样品,否则就不具有代表性。
一般蔬菜样品也按对角线法采取。番茄样品应选择簇位相同、成熟程度一致的果实,取果实的1/4 组成平均样品。
采取苹果、梨、桃、柑橘等水果的平均样品时,一般选1~3 株果树为代表,从植株的全部收获物中选取大、中、小果实以及向阳、背阳部分的果实混合成平均样品。葡萄等浆果,采样时可在不同地点的5~10 株植物上的各个部位包括向阳、背阳以及上、下各部位采样。
2.按生育期取样法:在幼苗期取样,因植株较小,采取的株数就比较多,尽管各种作物有所不同,总的原则是所取样品的干重应当是分析用的2 倍。
植株逐渐长大,每次采取的株数也相应减少,但绝不能采单株作样品。在各个生育期取样时,都应作观察记录。
取样地点一般在边行区,取样点的四周不应有缺株现象。
取样后,按分析目的分成各个部分,如根、茎、叶、穗等,然后捆好,附上标签,分别装入样品袋。
瓜果、蔬菜取回后因水分较多,容易霉烂,可在冰箱中冷藏,或用于干燥灭菌,或用酒精处理或烘干,以供分析之用。
(二)分析样品的处理与保存
采回的新鲜植株样品如果混有泥土,不应用水冲洗,可用湿布擦净,然后置空气流通处风干或烘干。烘干样品时,可把植株放入80℃烘箱中,以停止酶活动并驱除水分。烘干样品时,注意温度不能过高,以免把植株烤焦。最好不要晒,以免灰尘沾染或被风刮走。
全植株样品应按照根、茎、叶、种子等分开。果实必须剖出时,要用锋利的不锈钢刀子,不允许将其中汁液流失。
为了避免糖、蛋白质、维生素等成分的损失,可采用真空干燥或冷冻真空干燥法。风干或烘干的样品,根据其特点分别进行以下处理:
1.种子样品的处理:一般谷物种子的平均样品可用电动样品粉碎机粉碎。事先要把机器内收拾干净,最初粉碎出的少量样品可弃去不用,然后正式粉碎,使全部样品通过一定筛孔的筛子,混合均匀,按四分法取出一定数量的样品细粉作为分析样品,贮存于干燥的磨口广口瓶中,同时贴上标签,注明样品的名称、编号、采取地点、处理、采样日期和采样人姓名等。长期保存时,标签应涂石蜡,并在样品中加适当的防腐剂。
蓖麻、芝麻等油料种子应取少量样品在研钵内研碎,以免脂类损失。
2.茎秆样品的处理:干燥后的茎秆样品也要磨碎。粉碎茎秆的粉碎机不同于种子粉碎机,其切割部分由几付排列方向相反的刀片组成。粉碎后的样品按上法保存。
3.多汁样品的处理:一般多汁样品,如瓜果蔬菜等,其化学成分(糖、蛋白质、维
生素等)在保存中易发生变化,往往多用新鲜样品进行各项测定。将它们的平均样品切成小块,放入电动组织捣碎机中打成匀浆,如果样品含水量较少,可按样品重量加入适量水,然后捣碎。样品量少时可用手持匀浆器或在研钵内研磨,必要时可在研钵内加少量石英砂。
如果所测物质不稳定(如某些维生素和酶等),则上述操作均应在低温下进行。样品匀浆如来不及测定,可暂存冰箱内,或灭菌后密封保存。
4.丙酮干粉的制备:在分离、提纯或测定某种酶的活力时,丙酮干粉法是常用的有效方法之一。该种方法是将新鲜材料打成匀浆,放入布氏漏斗,按匀浆重量缓慢加入10倍的低温冰箱 内冷却到-15℃~-20℃的丙酮,迅速抽气过滤,再用5 倍冷丙酮洗3 次,在室温下放置1 小时左右至无丙酮气味,然后移到盛有五氧化二磷的真空干燥器内干燥。丙酮干粉的制备在低温下完成,所提丙酮干粉可长期保存于低温冰箱。用这种方法能有效地抽提出细胞中的物质,还能除掉脂类物质,免除脂类干扰,而且使得某些原先难溶的酶变得溶解于水。