血清蛋白琼脂糖凝胶电泳
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【原理】
琼脂 糖(agarose)是经过挑选,以质地较纯的琼脂(agar)作为原料而制成的。琼脂在化学上是由琼脂糖和琼脂胶组成的复合物。琼脂胶是一含有硫酸根和羟基的多糖,它具有离子交换性质,这种性质会给电泳及凝胶过滤以不良的影响。琼脂糖是直链多糖,它由D-半乳糖和3,6-脱水-L-半乳糖的残基交替排列组成。
琼脂糖主要通过氢键而形成凝胶。电泳时因凝胶含水量大(98-99%),近似自由电泳,因为固体支持物的影响少,故电泳速度快,区带整齐。而且由于琼脂糖不含带电荷的基团,电渗影响很少,是一种较好的电泳材料,分离效果较好。
血清中脂类物质与血清载脂蛋白结合成水溶性的脂蛋白(lipoprotein)形式存在。各种脂蛋白中所含载脂蛋白的种类及数量不同,各种脂蛋白颗粒大小也相差很大,因此,以琼脂糖凝胶为支持物,在电场中可使各种脂蛋白颗粒分离开来。
琼脂糖凝胶电泳 分离血清蛋白方法简单。将血清脂蛋白用脂类染料苏丹黑(或油红等)进行预染。再将预染过的血清加样于琼脂糖凝胶板加样槽中,通电后可以看到脂蛋白向正极移动,并分离出几个区带。
正常人血清脂蛋白可出现三条区带,从阴极到阳极依次为β-脂蛋白(最深),前β-脂蛋白(最浅)及α-脂蛋白(比前β-脂蛋白略深些),在原点处应无乳糜微粒。有时前β-脂蛋白也显
示不出来。
琼脂糖主要通过氢键而形成凝胶。电泳时因凝胶含水量大(98-99%),近似自由电泳,因为固体支持物的影响少,故电泳速度快,区带整齐。而且由于琼脂糖不含带电荷的基团,电渗影响很少,是一种较好的电泳材料,分离效果较好。
血清中脂类物质与血清载脂蛋白结合成水溶性的脂蛋白(lipoprotein)形式存在。各种脂蛋白中所含载脂蛋白的种类及数量不同,各种脂蛋白颗粒大小也相差很大,因此,以琼脂糖凝胶为支持物,在电场中可使各种脂蛋白颗粒分离开来。