Western转印与电泳的常见问题

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表1 Common problems for electrophoresis and western blot ing 问 题 可能原因 建议解决方法 推荐电压条件下电泳时间过长。电泳缓冲液过稀。配制新鲜缓冲液，使用1X稀释液。推荐电压条件下电流过高，热量过大。电泳缓冲液过稀。配制新鲜缓冲液，使用1X稀释液。推荐电压条件下电流过低或无电流。接触不良。在电泳前移除胶盒底部的封条；确认缓冲液没过加样孔；检查buffer core上导线连接。蛋白带型条状（streak）上样过量。
样品中盐浓度过高。降低蛋白上样量。通过透析或凝胶过滤降低样品中的盐浓度。样品沉淀。加大样品中SDS的浓度。样品中的污染，如脂类或DNA 复合物。离心或过滤样品以除去特定污染。制胶不佳。确保灌胶均匀，一次完成。条带模糊。蛋白样品部分变性。完全变性蛋白。蛋白样品部分还原。确保加入足够量的DTT或β巯基乙醇。电泳时间过长。观察前面的指示剂染料，掌握恰当的电泳时间。哑铃形条带或"微笑"条带。上样体积过大导致不完全堆积。使用恰当的上样体积。如果样品过稀，使用超滤浓缩。电泳过程中电场不均匀。如果蛋白浓度已知，上样时确保对称。分离胶表面不平。在制胶时使分离胶表面水平。凝胶过期。在指定的失效期前使用凝胶。