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Western Blot电泳

相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

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dxy_w0jtmb0w

为什么加样品的泳道会出现这种弥散的样子呢?做的是16kd和21kd的蛋白 300mA转膜30分钟 PVDF膜上marker颜色很浅 是转过了吗 

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3 个回答

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毛利小五郎的徒弟

有帮助

考虑是胶的问题,分离胶浓度太低可能会造成弥散

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loveliufudan

有帮助

样品在电泳过程中出现弥散的样子可能是由于以下几个原因:

1. 过量的样品:如果在泳道中加载了过多的样品,这些样品在电泳过程中可能会扩散到相邻的区域,导致泳道中出现弥散的样子。

2. 蛋白质聚合物形成:某些蛋白质在电泳过程中可能会形成聚合物,这些聚合物可能会导致泳道中的样品出现弥散的形态。

3. 转膜不完全:转膜过程中,如果转膜条件(如电流和时间)不合适或者转膜装置存在问题,可能会导致样品在转膜过程中没有完全转移到膜上,从而出现弥散的样子。根据您提供的信息,转膜条件为300mA转膜30分钟,这是常见的条件之一,但仍需确保蛋白质能够充分转移到膜上。

至于膜上marker颜色浅的问题,颜色浅可能是由以下几个原因导致:

1. 转膜不完全:如果转膜过程中转移到膜上的marker数量较少或者转膜时间不足,可能导致marker在膜上的颜色较浅。

2. Marker浓度过低:如果marker的浓度过低,即使转膜完全,膜上marker的颜色也可能较浅。您可以尝试增加marker的浓度来解决这个问题。

综上所述,出现弥散的样子可能是由于过量样品或蛋白质聚合物形成,而膜上marker颜色浅可能是由于转膜不完全或marker浓度过低。建议您重新评估加载样品的量、优化电泳条件和转膜条件,以及调整marker的浓度,以获得更好的结果。

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balalaLy

有帮助

你的loading不行,可以试一下添加b巯基乙醇,这样蛋白会浓缩得比较好。PVDF膜不存在转过的说法。

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