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T淋巴细胞转化试验(T Lymphocyte Transformation Test)

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一、 基本原理
T细胞在体外培养时,受到有丝分裂原(如PHA、ConA)刺激后,可出现细胞体积增大,代谢旺盛,蛋白和核酸合成增加,即向淋巴母细胞转化和增殖。淋巴细胞转化率的高低可以反映机体的细胞免疫 水平,因此可作为测定机体免疫功能的指标之一。淋巴细胞转化试验结果的读取可以有形态计数法、MTT法和同位素法三种。

MTT法即四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法。MTT是一种噻唑盐,化学名3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二苯基溴化四唑,水溶液为黄橙色。小鼠脾细胞受到ConA作用后发生增殖活化,其胞内线粒体琥珀酸脱氢酶活性相应升高,MTT作为其底物参与反应,形成蓝色的甲臜(Formazan)颗粒沉积于细胞内或细胞周围,经盐酸─异丙醇溶解后为蓝色溶液,可用酶标测定仪测定细胞培养 物的OD值,测定波长570nm。根据OD值的大小计算反应体系中细胞增殖程度。
3H-TdR 掺入法:细胞增殖的基本条件或前提为细胞质和细胞核 的复制,这是正常细胞增殖过程缺一不可的前提。一般来说,一个细胞周期可大致分为四期,即G1期、S期、G2期和M期。其中S期为DNA合成期,主要功能活动为DNA合成。3H-TdR即(甲基-3H)胸腺嘧啶核苷(
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