溶血反应与补体结合试验

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一．溶血反应
免疫血清与其相应的抗原 细胞（血球、细菌及其组织细胞相遇，并在补体的参与下可出现溶细胞反应。依抗原、抗体的种类不同可有溶血反应、溶菌反应等。
溶菌反应只在某些细菌 中出现（如霍乱弧菌）。应用溶血反应是补体结合反应中不可少的因素。溶血反应是由于抗原（红血球）和抗体（溶血素）进行特异性的结合，并吸着了补体，而使红血球在补体的作用下被溶解，于是产生了溶血现象。
材料：
1.抗原：2%绵羊红血球。
2.抗体：溶血素
3.补体：取健康豚鼠血清作为补体。
4.小试管、生理盐水、水浴箱。
方法：
1．取小试管3只，按下表加入各物（容量单位为毫升）
2．将上述3试管放在37℃水浴箱内15—30分钟观察有无凝血现象

 

试管

2%红血球

溶血素（2单位）

补体（2单位）

生理盐水

结果

1

0.5

0.5

0.5

0.5

 

 

2

0.4

0.5

——

1.0

 

 

3

0.5

——

0.5

1.0

 

二．补体结合反应
当抗原与其对应的抗体结合时，所生成的抗原抗体复合物能从溶液中将补体吸着此即谓补体结合。参与补体结合反应的抗原是透明的溶液，故补体结合现象不能被肉眼看出来，因此必须借助溶血系统（溶血素及相对应的羊血球）作为指示剂，来判定媒质中有无游离的补体，近而推定媒质中未知抗原（或抗体）和已知抗体（或抗原）是否进行了特异性的结合。本反应具有很高的敏感性及特异性，因之常应用于传染病的诊断，特别诊断病毒疾病和梅毒。
由于参与本反应的各种成分间有着一定量的关系，因此在作本试验之前，必须通过一系列的预备实验来确定各成分的使用量，故本反应的实验方法较为复杂。
本次实验以伤寒杆菌免疫 血清与其相对应的抗原补体结合试验为例。
材料：
1.抗原：伤寒的抽出液
2.抗体：伤寒杆菌的免疫血清
3.补体：豚鼠血清
4.溶血素：抗绵羊血细胞的兔血清
5.2%绵羊红血球
6.小试管、试管架、水浴锅。
方法：
（一）预备试验（示教说明）
预备试验包括溶血素效价的滴定，补体效价的滴定，抗原效价的滴定及被检血清的处理。
（1）溶血素效价的滴定
按照下表加入各物

凡最高稀释度的溶血素可呈现完全溶血者为一个单位。依上表结果第10管（即1：4000倍稀释）0.5毫升溶血素为一个单位，在溶血反应中常用0.5毫升中含有2个溶血素单位的溶液，所以试验时应取1：2000倍稀释的溶液。
（2） 补体单位滴定
依下表加入各试剂：

能引起完全溶血的最小补体量称为准确单位，上表中第3管（即0.3毫升），但因补体的效价可能有部分损失，故普通稍高的一管为实用单位，实际试验时须用两个实用单位。
上表的结果为：
补体标准单位：0.3毫升
补体实用单位：0.35毫升
补体两个实用单位：0.70毫升
因试验时是两个实用单位的补体0.5毫升，可依下列比例关系换算：
20：0.7=ⅹ：0.5
ⅹ=14.3
即须将补体稀释14.3倍，用0.5毫升则含有两个实用单位。
（1）抗原的滴定
在用已知抗原测定未知抗体时，必须先滴定抗原效价以决定本试验时所需抗原的最适浓度（反之用已知抗体测定未知抗原时，则需滴定抗体效价）

如血清对照管呈完全或部分不溶血是为抗补体现象。血清严重污染细菌，混有淋巴液或显著溶血时，常产生很强抗外体作用。又如试管、吸管不清洁，也可出现抗补体。若有抗补体发生，应抽血重试验。