溶血反应与补体结合试验
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一、溶血反应
免疫血清与其相应的抗原细胞（血球、细菌及其组织细胞）相遇，并在补体的参与下可出现溶细胞反应。依抗原、抗体的种类不同可有溶血反应、溶菌反应等。
溶菌反应只在某些细菌中出现（如霍乱弧菌）。应用溶血反应是补体结合反应中不可少的因素。溶血反应是由于抗原（红血球）和抗体（溶血素）进行特异性的结合，并吸着了补体，而使红血球在补体的作用下被溶解，于是产生了溶血现象。
1、材料
（1）抗原：2%绵羊红血球；
（2）抗体：溶血素；
（3）补体：取健康豚鼠血清作为补体；
（4）小试管、生理盐水、水浴箱。
2、方法
（1）取小试管3只，按下表加入各物（容量单位为毫升）；
（2）将上述3试管放在37℃水浴箱内15—30分钟观察有无凝血现象。
| 试管 | 2%红血球 | 溶血素（2单位） | 补体（2单位） | 生理盐水 | 结果 |
| 1 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | |
| 2 | 0.4 | 0.5 | —— | 1.0 | |
| 3 | 0.5 | —— | 0.5 | 1.0 |
二、补体结合反应
当抗原与其对应的抗体结合时，所生成的抗原抗体复合物能从溶液中将补体吸着此即谓补体结合。参与补体结合反应的抗原是透明的溶液，故补体结合现象不能被肉眼看出来，因此必须借助溶血系统（溶血素及相对应的羊血球）作为指示剂，来判定媒质中有无游离的补体，近而推定媒质中未知抗原（或抗体）和已知抗体（或抗原）是否进行了特异性的结合。本反应具有很高的敏感性及特异性，因之常应用于传染病的诊断，特别诊断病毒疾病和梅毒。
由于参与本反应的各种成分间有着一定量的关系，因此在作本试验之前，必须通过一系列的预备实验来确定各成分的使用量，故本反应的实验方法较为复杂。
本次实验以伤寒杆菌免疫血清与其相对应的抗原补体结合试验为例。
1、材料：
（1）抗原：伤寒的抽出液；
（2）抗体：伤寒杆菌的免疫血清；
（3）补体：豚鼠血清；
（4）溶血素：抗绵羊血细胞的兔血清；
（5）2%绵羊红血球；
（6）小试管、试管架、水浴锅。
3、方法：
预备试验（示教说明） 预备试验包括溶血素效价的滴定，补体效价的滴定，抗原效价的滴定及被检血清的处理。
（1）溶血素效价的滴定 按照下表加入各物
| 管号 | 溶血素（ml） | 溶血素稀释倍数 | 1：20补体（ml） | 生理盐水（ml） | 20%羊血球（ml） | 假定结果 | |
| 1 | 0.5 | 1: 300 | 0.3 | 1.7 | 0.5 | 摇 匀 后 置 37 ℃ 水 浴 一 小 时 | 全溶解 |
| 2 | 0.5 | 1: 500 | 0.3 | 1.7 | 0.5 | 全溶解 | |
| 3 | 0.5 | 1: 800 | 0.3 | 1.7 | 0.5 | 全溶解 | |
| 4 | 0.5 | 1:1000 | 0.3 | 1.7 | 0.5 | 全溶解 | |
| 5 | 0.5 | 1: 1200 | 0.3 | 1.7 | 0.5 | 全溶解 | |
| 6 | 0.5 | 1:1600 | 0.3 | 1.7 | 0.5 | 全溶解 | |
| 7 | 0.5 | 1: 2000 | 0.3 | 1.7 | 0.5 | 全溶解 | |
| 8 | 0.5 | 1: 2400 | 0.3 | 1.7 | 0.5 | 全溶解 | |
| 9 | 0.5 | 1: 3200 | 0.3 | 1.7 | 0.5 | 全溶解 | |
| 10 | 0.5 | 1: 4000 | 0.3 | 1.7 | 0.5 | ||
| 11 | 0.5 | 1: 4800 | 0.3 | 1.7 | 0.5 | ||
| 12 | 0.5 | 1:6000 | 0.3 | 1.7 | 0.5 | ||
| 对照 | 1 | 0.3 | 2.2 | 0.5 |
凡最高稀释度的溶血素可呈现完全溶血者为一个单位。依上表结果第10管（即1：4000倍稀释）0.5毫升溶血素为一个单位，在溶血反应中常用0.5毫升中含有2个溶血素单位的溶液，所以试验时应取1：2000倍稀释的溶液。
（2）补体单位滴定
依下表加入各试剂：
| 管号 | 1：20补体（ml） | 抗原（ml） | 生理盐水（ml） |
摇 匀 后 置 37 ℃ 水 浴 45 分 钟 |
溶血素（2单位）（ml） | 20%羊血球悬液 | 摇
匀 后 置 37 ℃ 水 浴 15 分 钟 |
结果 |
| 1 | 0.20 | 0.5 | 1.30 | 0.5 | 0.5 | 不溶血 | ||
| 2 | 0.25 | 0.5 | 1.25 | 0.5 | 0.5 | 稍溶血 | ||
| 3 | 0.30 | 0.5 | 1.20 | 0.5 | 0.5 | 全溶血 | ||
| 4 | 0.35 | 0.5 | 1.15 | 0.5 | 0.5 | 全溶血 | ||
| 5 | 0.40 | 0.5 | 1.10 | 0.5 | 0.5 | 全溶血 | ||
| 6 | 0.45 | 0.5 | 1.05 | 0.5 | 0.5 | 全溶血 | ||
| 7 | 0.50 | 0.5 | 1.00 | 0.5 | 0.5 | 全溶血 | ||
| 8 | —— | 0.5 | 1.50 | 0.5 | 0.5 | 不溶血 |
能引起完全溶血的最小补体量称为准确单位，上表中第3管（即0.3毫升），但因补体的部分损失，故普通稍高的一管为实用单位，实际试验时用两个实用单位。
上表结果为：补体标准单位：0.3毫升；补体实用单位：0.35毫升；补体两个实用单位：0.70毫升。因试验时时两个实用单位的补体0.5毫升，可依下列比例关系换算：20：0.7=x：0.5，得x=14.3，即需将补体稀释14.3倍，用0.5毫升则含有两个实用单位。
（3）抗原的滴定
在用已知抗原测定未知抗体时，必须先滴定抗原效价以决定本试验时所需抗原的最适浓度（反之用已知抗体测定未知抗原时，则需滴定抗体效价）
| 试剂 \ 管号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
| 1:5稀释血清 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | —— | —— | —— |
| 伤寒抗原2U | 0.5 | —— | —— | 0.5 | —— | —— |
| 痢疾抗原1:80 | —— | 0.5 | —— | —— | —— | —— |
| 补体2U | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
| 生理盐水 | —— | —— | 0.5 | 0.5 | 1.0 | 1.5 |
| 摇匀放置37℃水浴中30min | ||||||
| 溶血素2U | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | —— |
| 2%羊血球 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
| 摇匀放置37℃水浴中15min | ||||||
| 说明 | 试验管 | 特异性对照 | 血清对照 | 抗原对照 | 溶血素对照 | 羊血球对照 |
如血清对照管呈完全或部分不溶血是为抗补体现象。血清严重污染细菌，混有淋巴液或显著溶血时，常产生很强抗外体作用。又如试管、吸管不清洁，也可出现抗补体。若有抗补体发生，应抽血重试验。
