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双色红外荧光检测技术

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基因组 序列的迅速获得推动了一门新兴学科——功能基因组学的发展,这一学科重点关注基因功能的变化。扩增性片段长度多态性(Amplified restriction fragment length polymorphism,AFLP)分析以及反向遗传学都是功能基因组学的重要组成部分。

传统的反向遗传学,例如用转座子(transposon)敲除特定基因,虽然可以准确测定表型,但需要进行耗时的转基因或复杂的组织培养。而且由于这种基因敲除的方法将整个基因敲除,无法观察到活性基因功能部分缺失的结果。

为克服此基因敲除方法的局限性,进一步获得关于活性基因突变 的信息,Fred Hutchinson癌症研究中心的研究者们发明了一种定向诱导基因组局部突变(TILLING: Targeting Induced Local Lesions In Genomes)技术。该方法具有简单高效的特点,它利用化学突变方法来获得所有基因的传统的点突变等位基因系列。对那些表型分析时会牵涉到亚致死等位基因的重要基因,TILLING的方法具有其独特的优势。随着TILLING方法有效应用到越来越多的生物种类,如果蝇,拟南芥,斑马鱼,玉米等,它在遗传学研究方面的重要价值也越发体现出来。

但由于点突变一般很难被检测出来,一直是TILLING技术应用上的一个障碍。要得到好的结果,要求检测仪器不仅灵敏度高,还能够识别假阳性位点。我们在这儿给大家引荐一种更简便,灵敏,准确的高通量 TILLING分析技术:双色红外荧光检测技术。

双色红外荧光检测技术是美国LI-COR公司的专利技术。LI-COR长期致力于此项技术在生物学研究中的应用,他们开发的Odyssey双色荧光扫描系统及DNA遗传分析系统都取得了很大成功。由于杂质、干扰分子在红外区几乎不发光,用红外荧光进行检测的背景非常低,灵敏度很高,可检测到低达15amoles的荧光分子。加上双通道检测(680nm激发,710nm检测;780nm激发,820nm检测),两个通道检测波长相距110nm,相对于通常的可见荧光四色检测来说,几乎没有光谱重叠的干扰(见下图),保证了TILLING分析中每一个突变碱基的准确识别及整个检测的灵敏度。

双色红外荧光检测技术

 

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