染色体Ｃ带技术

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一、实验目的
通过实验，初步掌握动、植物染色体 Ｃ带分带技术。
二、实验原理
Ｃ带是显带技术中最简单的一种带型。使用这种技术，能使着丝粒 型的异染色质着色，这种异染色质通常位于着丝粒周围并常含有高度重复序列的DNA。因为通常都在着丝粒处出现，所以称之为C-带。
关于产生Ｃ带的机理，有人认为用氢氧化钡和盐类处理染色体，能从染色体中提取高达80％的DNA。DNA被优先地从非Ｃ带区提出，结果染色体臂着色浅而着丝粒异染色质着色深。有人研究表明，着丝粒异染色质仅与组蛋白结合，而常染色质含有大量非组蛋白蛋白质。一般有这样的看法，活跃的染色质比遗传上不活跃的染色质更富以非组蛋白蛋白质。这说明，仅与组蛋白结合的染色质比含有大量非组蛋白蛋白质的染色质，结构紧密得多。也就是这种紧密的结构保护着丝粒的异染色质免受氢氧化钡和盐类的破坏，从而产生Ｃ带。
三、实验材料
小白鼠骨髓细胞染色体制片不经染色留用的标本片，或采用酸处理压片法制备植物 根尖细胞染色体的标本片。
四、实验器具和药品试剂
显微镜、恒温水浴锅、分析天平、镊子、切片架、切片盒、立式染缸、漏斗、量筒、吸管、滤纸等。
盐酸、氢氧化钡、Giemsa母液、磷酸缓冲液、2×SSC溶液。
五、实验方法和步骤
(一) BSG(Barium hydroxide， Saline，Giemsa)法：
将标本片浸入新配制的5％Ba(OH)2溶液(60℃)中处理5～10分钟后，用 60℃热水慢慢倒入染色缸中，使氢氧化钡慢慢溢出，直到Ba(OH)2被热水置换出来，最后再用热水漂洗2次，以彻底洗净氢氧化钡。或经0.2N HCL 漂洗数秒，用蒸馏水漂洗干净。然后在2×SSC溶液（65℃）中温浴 60～120分钟。经水洗, 稍干后用1/10 Giemsa 染液染色20分钟。流水洗片，稍干后镜检。
(二) HSG(Hyolorochloric acid， Saline， Giemsa)法：
将标本片在0.2N HCL中室温处理60分钟。蒸馏水冲洗后，置2×SSC溶液(65℃)中温育15分钟。经蒸馏水冲洗，稍干后用1/10 Giemsa 染液染色 10分钟左右。水冲洗，稍干后镜检。
(三) 注意事项
分带处理适度的染色体应为深红略带蓝色,具黑色带纹。如染色体红色，无带，则变性处理不够，应加大Ba(OH)2浓度或加长变性时间；如染色体未染上色，或只着丝点附近染成黑色，则变性过度，应降低Ba(OH)2浓度，或减少变性时间；如细胞核和染色体均不见，说明变性极过度。
蚕豆和洋葱采用HSG法较好，而大麦和小麦采用BSG法效果较好。
(四) 带型分析 将已分带的标本，进行显微摄影，冲洗、放大，按核型分析方法将染色体编号进行带型分析，要求详细记录各染色体上，各带纹的位置，宽窄着色深浅和形状。最后绘制染色体模式图，在各条染色体模式图上标出各条带纹的位置、宽窄、深浅、形状等线条。
植物染色体C带主要包括四种带型：
1．着丝粒带 是指着丝粒及其附近的带，大部分植物都有这种带型。
2．中间带 分布于染色体着丝粒至末端之间的带叫做中间带。小麦B组染色体中间带较多且明显；蚕豆染色体中间带一般在长臂上。
3．末端带 位于染色体的末端的带。洋葱有较明显的末端带，小麦仅部分染色体显示，大麦、蚕豆则不显示。
4．核仁缢痕带 是指核仁染色体特殊的带型，位于核仁组织中心区，蚕豆、玉米、大麦、小麦均有明显的核仁缢痕带。