减数分裂实验

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一、实验目的
通过植物花粉母细胞的制片和观察，了解小孢子的形成过程以及减数分裂中染色体 的变化情况，并进一步掌握细胞染色体制片的基本技能。
二、实验原理
在高等生物里雌雄性细胞形成的过程中，都是先由有性组织（如花药和胚珠、精巢和卵巢）中的某些细胞分化为孢母细胞（2n）,以及精母与卵母细胞（2 n）。进一步由这些细胞进行一种连续二次的减数分裂，即减数第一分裂和减数第二分裂，最终各自产生4个小孢子或精细胞，或是分别产生一个大孢子或卵细胞与三个退化的极体（1 n）。在分裂过程中，可以辩认染色体形态和数量上的动态变化，从而为遗传学研究中远缘杂种的分析、染色体工程中的异系鉴别、常规的组型分析以及三个基本规律的论证，提出了直接与间接的依据。
三、实验材料
蚕豆、水稻、玉米等花药。
四、实验器具和药品试剂
显微镜、镊子、解剖针、刀片、载玻片、盖玻片、量筒、滴瓶、切片架、切片盒、15cm培养皿、小培养皿、广口瓶、吸水纸。
甲醇、冰醋酸、95%乙醇、无水乙醇、树胶、改良苯酚品红染色液。
五、实验方法和步骤
（一）取材固定 取材的时间及材料大小必须十分恰当，才能获得更多的花粉母细胞分裂 相，以供观察。
1．蚕豆 　蚕豆现蕾后，于上午7～9时摘取茎顶幼小花序，将周围小叶和苞叶去掉，留长约1mm 左右的花苞，放入内装有卡诺氏固定液的广口瓶中，固定3～24小时，转入70%酒精中置冰箱内保存。
2．水稻 剑叶与其下一叶的叶枕平齐，即叶枕距为零时取材，早熟品种应适当提前，叶枕距可为负；晚熟品种应延迟，叶枕距应为正。通常穗长6～8cm，颖花长3mm为花粉母细胞分裂始期；穗长13～15cm，颖花长4mm为减数分裂盛期；穗长达全长，颖花长6mm时为减数分裂终期。于上午6～9时依上述标准取材，固定保存方法同上。
3．玉米 玉米孕穗初期，早熟品种约10片完全展开叶，中熟品种约12～14片展开叶，晚熟品种约14～16片展开叶时取材。从喇叭口往下捏叶鞘，有松软感觉，即为雄花序所在部位，用刀片纵向划一切口，剖开取出数条花序分枝检查，如果先端小颖花长3～4mm,花药长2～3mm时，花粉母细胞减数分裂相较多，即可取用。取材时间一般为上午7～9时，固定保存方法同上。
（二）制片方法 先将玉米幼穗置于培养皿内，加进少许70%酒精，以防材料变干。实验时，取某一分枝，从不同部位剥离出颖花放在载玻片上。用解剖针或镊子剥开颖壳，取出花药，把颖壳清理干净后，用刀片把花药横切二至三段，滴一滴染液，用镊子将花粉母细胞从花药中挤压出来。先用低倍镜检查，如有所需时期的细胞，即可将花药移到另一块载玻片上，滴上染液，再次将花粉母细胞挤出来，可重复做二至三张片。待把空的花药壁清除干净后，再盖上盖玻片，换至高倍镜观察。
（三）制作永久切片