减数分裂(meiosis)实验原理和方法

一、实验目的
观察动物减数分裂的过程，掌握动物精巢减数分裂的制片方法。
二、实验原理
动物生殖细胞在减数分裂时，一个精母细胞连续分裂两次，形成四个精细胞，但在此过程中精母细胞的染色体却只复制一次，所以，减数分裂后所产生的每个子细胞中染色体数目却只有精母细胞的一半，而且，在减数分裂过程中，染色体将发生一系列形态结构上的变化。这些是我们研究动物染色体的好材料。
动物在配种季节里（无发情季节为终年）精母细胞都在不断地分裂增殖形成精子，因此，取出睾丸组织，经过低渗液固定等适当处理，制成细胞悬液，再用空气干燥法制片，所得标本常可观察到减数分裂的各个时期。
三、实验材料
性成熟的公鸡
四、实验 仪器 和药品
显微镜，手术刀，剪刀，镊子，表面皿，烧杯，滴管，尖底 离心管 ，离心机（1000转），玻璃棒，水浴锅
生理盐水，0.075MKCL溶液，Giemsa染液，Canony固定液（3甲醇：1冰醋酸）
四、实验方法
（一）动物睾丸减数分裂标本制作
1．手术法取出性成熟公鸡睾丸，用生理盐水洗去血液及血。置于盛有少量0.075MKC1溶液表面皿中，将睾丸用锐利的剪刀剪碎，随即用瓷杆研磨5-10分钟。
2．将睾丸组织悬液移入尖底 离心管 中，在200rpm离心3-4分钟，使块状组织沉底，用吸管吸取中层的细胞悬液2-4ml，移入另一离心管中，加入等量0.075MKC1在37℃恒温 水浴 箱中低渗20-30分钟。
3．取出离心管，沿瓶壁加入1ml固定液，吹打均匀后在1000rpm离心6分钟，吸去上清液，得细胞沉淀。
4．加入新配制的固定液（3甲醇：1冰醋酸）5ml，5分钟后，用吸管将细胞团块轻轻打散，固定20分钟。
5．在1000rpm离心10分钟，去上清液。
6．再加入新配制的固定液5ml，5分钟后，用吸管将细胞团块轻轻打散，固定20分钟。
7．再次在1000rpm离心10分钟，去上清液。
8．视细胞的多少加入适量的固定液。
9．制片：取一张先在冰箱（0-4℃）中的清洁载玻片，用滴管吸取1---4滴细胞悬液，用嘴吹气使细胞分散，再通过火焰使其干燥。
10．用6-8%Giemsa染液（改良苯酚品红染液）染色20-30分钟。用清水冲洗后镜检。
11．镜检：找出减数分裂各个时期的细胞。
五、作业：
绘出你所看到的鸡减数分裂中各时期简图。
附：染液的配制
1．Giemsa原液
称重1克Giemsa染料，溶于66毫克干油中（研钵中研细，置56℃恒温 水浴 锅90分钟），冷却后，加入65毫升甲醇混合，过滤装入棕色瓶中备用。此液为原液。
2．磷酸盐缓冲液配制
取2.2gNa ₂ HPO ₄ ·12H ₂ O和0.55gNaH ₂ PO ₄ ·2H ₂ O置于100ml容量瓶中，加入约30ml 蒸馏 水溶解后用 蒸馏 水定容至100ml，PH值为7.0-7.2。
3．Giemsa工作液
姬姆萨染液的配制方法为原液、 缓冲液 、蒸馏水的比例为2：3：5。
4．改良苯酚品红溶液的配制。
① 复红原液      碱性品红        3g
70%酒精        100ml
② 染色液        复红原液        10ml
5%苯酚水溶液   90ml
冰醋酸          10ml
甲醛            10ml
（染液配成后，放置24小时，过滤后方可使用）。