绒毛染色体制备
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绒毛取样前者首先要检查阴道分泌物以判别阴道的洁净度,防止取样导致宫内感染。其次需做B超检查,一是确定胚胎大小,二是确定胚芽有无心血管搏动,三是确定胚芽在子宫内的位置,用以判别取材时间,是否取材及取样器进宫的角度及深度。
1、 实验材料
妇科阴道冲洗物品、绒毛取样器、5ml注射器、培养皿、小镊子、5ml离心管、甲酸、柠檬酸钠、冰乙酸、PMRI 1640、秋水仙素、载玻片等。
2、 培养液配制
PRMI 1640 10-15ml
秋水仙素10ug/ml 1ml
3、 操作过程
(1)1‰新洁而灭冲洗阴道,用卵圆钳固定子宫颈,根据妇查及B超提示选择角度及浓度探性插入绒毛取样器,当有弹性阻挡感且深度符合B超所示时,抽出取样器内芯,接上5ml注射器,抽出4-5ml,此时,注射器内可见有血性液体流进;
(2)取一干净培养皿,内加PRNI 1640 5ml,内含秋水仙素0.06ug/ml。慢慢抽出取样器,将所吸出物注入培养皿内,并用1640冲洗注射器及取样器,混匀。置培养箱30-40分钟;
(3)挑选发育良好的绒毛放入另一小培养皿中,用预温37℃的0.075M。KCL与10%柠檬酸钠1∶1混合液漂洗两次。
(4)用眼科小剪剪碎绒毛,再将2滴秋碱加入上途漂洗低渗液低渗30分钟;
(5)加3∶2的甲醇冰乙酸固定液0.2ml,预固定,1000rpm8分钟,弃上清液;(6)加新鲜配制的3∶2固定液3ml;固定30分钟,2000rpm8分钟,弃上清液;(7)第二次固定可加3∶1甲醇冰乙酸固定液3ml固定30分钟,2000rpm8分钟,弃上清液;
(8)离心后,加所余体积的60%冰乙酸,打匀,2分钟后加等量甲醇,打匀,2000rpm8分钟,弃上清液。
(9)3m1 3∶1甲冰固定液过夜,冰水制片;
(10)80℃考片2小时,自然冷却。(11)G分带处理,观片。