细胞融合法提高HBsAg表达量方法研究

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【摘要】 目的 提高HBSA g的表达量。方法 将CHO-C 28 细胞与NS-1细胞融合，用反向血凝法检测滴度。结果 融合后第11天，出现瞬时高表达，HBsAg表达量最高为1:2048，而对照仅为1:256。结论 融合法可以明显提高HBsAg的表达量，为进一步研究提供了证据。
关键词 CHO-C 28 细胞 NS-1细胞 细胞融合 HBsAg表达量
The study on enhancing expression of HBsAg with the Cell fusion
He Wei，Jin Lijie，Li Yong，et al.
Changchun Institute of Biological Product，Changchun130062.
【Abstract】 Objective To enhance the expression of HBsAg.Methods We make
the CHO-C 28 cell exˉpressing HBsAg and NS-1cell fuse together，and then determine the titre by RPHA.Results There are transient high expression
in the eleventh day after fusion，the titre of HBsAg is1:2048，that of control group is not more than1:256.Conclusion The fusion method can
enhance the expression of HBsAg，the result of this experiment provide eviˉdences for further research.
Key words CHO-C 28 cell NS-1cell cell fusion expression of HBsAg
CHO-C 28 细胞是一种能够高效表达HBsAg的重组中国仓鼠卵巢细胞株，目前已投入大规模生产。提高HBsAg的表达水平，不仅可以提高疫苗产量，还会大幅度降低生产成本，一直是我们研究的方向。Cartwright ［1］ 报告，将骨髓瘤细胞SP2/0与能表达t-PA的CHO细胞融合，结果明显提高了t-PA的表达量。据此，我们将CHO-C 28 细胞与骨髓瘤细胞NS-1融合，结果出现了瞬时高表达，表明此方法可以提高HBsAg的表达量。
1 材料与方法
1.1 材料 CHO-C 28 细胞:本室保存种子库提供。NS-1细胞，8-AG，HAT，PEG-4000:由博德公司李勇老师惠赠。DMEM 培养基:由美国GIBCO公司生产。小牛血清:由杭州四季青工程材料研究所生产。RPHA试剂盒:兰州生物制品研究所生产。
1.2 方法 ［2］
1.2.1 NS-1细胞的制备 为确保细胞对HAT培养基的敏感性，复苏稳定后，移种于含1%8-AG的DMEM培养基中，融合前1周换用无8-AG的培养液。
1.2.2 CHO-C 28 细胞的制备 复苏稳定的细胞，融合前用不含MTX的培养基传代一次，备用。
1.2.3 细胞融合 采用聚乙二醇法。收集对数生长期的CHO-C 28 细胞与NS-1细胞（比例约为1:2），用单纯DMEM混合后分为3份分别离心，800r/min离心8min，弃上清液，加入50%PEG-40000.8ml于37℃水浴中融合，加预热的单纯DMEM终止PEG作用，800r/min离心6min收集细胞。弃上清液，3份融合细胞分别加入不同的选择培养基轻轻混悬，各移种于96孔培养板，100μl/每孔，37℃，5%CO 2 培养。1号板选择培养基为:1%8-AG+HAT;2号板为:2%8-AG+HAT;3号板为:HAT。培养至第7天时全量换2%8 -AG+HAT液。
1.2.4 对照 融合前留取部分CHO-C 28 细胞，移种于另一96孔板，加完全DMEM培养基，为对照孔。
1.2.5 检测 采用反向血凝法检测HBsAg表达量。
2 结果
2.1 形态学检测 光学显微镜下可见:融合细胞培养至5～7d，3块板未融合的NS-1细胞趋于死亡，7～9d，1号，2号板未融合的CHO-C 28 细胞趋于死亡，杂交瘤出现并缓慢分裂生长，形态呈上皮型，与CHO-C 28 细胞类似，体积稍大。3号板的CHO-C 28 母本细胞与融合细胞共同旺盛生长。未融合的对照细胞生长也很旺盛。