原生质体融合技术(仙台病毒法、聚乙二醇(PEG)法、电融合法)
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一、仙台病毒法
仙台病毒诱导细胞融合经四个阶段:
①两种细胞在一起培养,加入病毒,在4℃条件下病毒附着在细胞 膜上。并使两细胞相互凝聚;
②在37℃中,病毒与细胞膜发生反应,细胞膜受到破环,此时需 要Ca2+和Mg2+,最适PH为8.0一8.2;
②细胞膜连接部穿通,周边连接部修复,此时需Ca2+和ATP;
④融合成巨大细胞,仍需ATP 。
病毒促使细胞融合的主要步骤如下:
1.两个原生质体或细胞在病毒黏结作用下彼此靠近;
2.通过病毒与原生质体或细胞膜的作用使两个细胞膜间互相渗透,胞质互相渗透;
3.两个原生质体的细胞核互相融合,两个细胞融为一体;