流式检测细胞周期
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线粒体 膜电位(MMP):使用几种染料中的其中一种就可以检测到细胞在凋亡过程中MMP的降低,如双氰基-双己氧基羰基靛蓝,它能够隐藏在活细胞的线粒体内。当MMP体系崩溃时,细胞的荧光就会减少。 磷脂酰丝氨酸(PS)在细胞表面的分布情况: PS一般分布在质膜的内侧上。在细胞凋亡过程中,PS残余物会曝露在细胞表面。这种变化可以通过复合蛋白钙依赖的磷脂结合蛋白V与PS结合来进行检测。所使用的细胞必须是未经修复的,因为钙低速的磷脂结合蛋白V不能到达完整细胞的内部。PI常被用来加到二次坏死细胞中来进行鉴别。 DNA消化:在最新的细胞凋亡的一系列反应过程中,一种特异的内切核酸酶能够将染色体这间的连接点打断,形成大量的小片段,这些小的片段是一些低聚体,其大小约为180bp。可以通过以下两种方法对DNA链的断裂进行检测:观察DNA柱状图的sub-G1顶点;用脱氧核糖核苷末端转移酶对DNA链的断口进行标记(TUNEL检测)。 Sub-G1点:如果细胞在乙醇中固定,随后再水合时,一部分低分子量的DNA会被滤掉,以降低DNA的含量。这些细胞会在DNA柱状图中作为独立的峰被观察到。 TUNEL检测: DNA链的断裂末端可以通过酶标记作用进行标记。在70%乙醇中固定之前,细胞在1%多聚甲醛中固定以将小的DNA片段结合到细胞中去,然后和Tdt以及一种已标记的核苷一起进行培育。所用的这些核苷包括:地高辛-dUTP,用经FITC标记的抗地高辛配基进行检测;生物素-dUTP,用经FITC标记的抗生素蛋白进行检测;溴-dUTP,用抗BrdUrd的FITC进行检测。 在加入PI标记DNA后,绿(FITC)与红(PI)相对的荧光能够进行记录。凋亡的细胞会发出绿色的荧光,经染色过的DNA表明从凋亡的细胞中的细胞循环间隔会被诱导产生。
细胞生长及死亡:组织的发育和肿瘤的生长在细胞分裂和死亡的平衡是同样的。在许多细胞动力学研究中,它们具有同样重要的地位。细胞仪和部分多功能流式细胞仪 在程序上给予新的视觉。