放射免疫对流电泳技术

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(一)原理

将放射性元素标记的抗体(或抗原 )与相应的抗原(或抗体)沉淀时，沉淀线通过自显影而证实。所谓自显影，就是通过复合物中的标记同位素在蜕变过程中 放出的射线，作用于感光材料的卤化银晶体而产生潜影，再经过显影把“像”显示出来。这样，能检出肉眼看不见的沉淀线，从而提高反应的敏感性，这种方法可应 用于凝胶中的所有反应。

(二)材料

1.放射性同位素标记的抗原或抗体

2.X—射线胶片或全色胶片

3.显影液与定影液

4.其它同对流免疫 电泳

(三)操作方法

1.按对流免疫电泳制备凝胶板并打孔。

2.加样 阴极端孔内加抗原，阳极端孔内加抗体。在加被检抗体样品时，迅速加入标记抗原(2 000~3 000cpm)，并使之混合，勿使抗原吸收后再加标记抗原，以免由于标记原的滞面而形成假阳性。

3.电泳 电流2.6cm×7.5cm的小板用4mA。

4.电泳后，平板浸在3%HCl中漂洗8h，换液2次。

5.用流水漂洗过夜。

6.干燥 室温或鼓风机吹干。

7.曝光 在暗室将胶片切成与平板一样大小，然后将药面密接凝胶面，再在胶片上压一张玻板，用黑布包严，皮筋扎紧，曝光时间与所用同位素及保存期有关。181I，一周内5h~10h;1~2周内24h;2~3周内48h。125I，在2个月内10h。

8.冲洗 全色胶片冲片方法，水洗、20℃显影10min、水洗、定影、水洗、凉干，观察结果。

(四)结果判定

在抗原抗体孔之间形成一条清晰的黑色影像者，判为阳性。