放射免疫对流电泳

 

（一）原理

将放射性元素标记的抗体(或抗原)与相应的抗原(或抗体)沉淀时,沉淀线通过自显影而证实。所谓自显影,就是通过复合物中的标记同位素在蜕变过程中放出的射线,作用于感光材料的卤化银晶体而产生潜影,再经过显影把“像”显示出来。这样,能检出肉眼看不见的沉淀线,从而提高反应的敏感性,这种方法可应用于凝胶中的所有反应。

（二）材料

1、放射性同位素标记的抗原或抗体

2、X―射线胶片或全色胶片

3、显影液与定影液

4、其它同对流免疫电泳

（三）操作方法

1、按对流免疫电泳制备凝胶板并打孔。

2、加样阴极端孔内加抗原,阳极端孔内加抗体。在加被检抗体样品时,迅速加入标记抗原(2 000~3 000cpm),并使之混合,勿使抗原吸收后再加标记抗原,以免由于标记原的滞面而形成假阳性。

3、电泳电流2.6cm×7.5cm的小板用4mA。

4、电泳后,平板浸在3%HCl中漂洗8h,换液2次。

5、用流水漂洗过夜。

6、干燥室温或鼓风机吹干。

7、曝光在暗室将胶片切成与平板一样大小,然后将药面密接凝胶面,再在胶片上压一张玻板,用黑布包严,皮筋扎紧,曝光时间与所用同位素及保存期有关。181I,一周内5h~10h;1~2周内24h;2~3周内48h。125I,在2个月内10h。

8、冲洗全色胶片冲片方法,水洗、20℃显影10min、水洗、定影、水洗、凉干,观察结果。

（四）结果判定

在抗原抗体孔之间形成一条清晰的黑色影像者,判为阳性。