大鼠内皮细胞的培养方案

本人总结了下大鼠内皮细胞的培养方案
一，消化法。优点：获得的细胞比其他方法纯。缺点：获得细胞比较少。
常见问题及解决方法：1.消化的时间不好控制时，建议大家分两段时间消化，消化30分钟时收取消化液放入一个离心管，30分到45分钟段收集的放入另一离心管，离心后看看第二管是否有杂细胞，若没有就把两管混合用，若有就只用第一管的。2.消化液，我的经验是5份0.2％胶原酶和1份0.125％胰酶。3.若很难消化时，可以磁力搅拌消化。注意消化法时结扎一定要紧！
二，植快法。优点：获得细胞比较多。缺点：很多，动脉小不好操作，动脉快不好内面朝下，容易浮起来等等。而且成纤维细胞比较多也不好除去。
常见问题及解决方法：1.动脉太小不好移动时，把弯的吸管头在酒精灯上多烧一会，冷确后一块一块吸到培养瓶，30快就差不多了，1mm3大小。2.容易浮起来时，预先要铺明胶，把动脉快移进去后不要加培养液，直接放到培养箱，4到5小时后再加。因为吸动脉快时动脉块是湿润的。3.除成纤维细胞要用细胞刮刀慢慢刮了。
三，植环法。优点：获得细胞比较多，比植块法稍简单，除成纤维细胞也简单。缺点：有成纤维细胞。
常见问题及解决方法：环内是内皮细胞，环外成纤维细胞除去方法，一是切环前用60°的无菌pbs热休克法，休克的时间控制在2到3秒，不然就影响了内皮细胞，二是在培养瓶上做记号用细胞刮刀刮除。
四，灌注法。本人最近正在用自己发明的一种改进了的灌注法，如果成功了就和大家分享！