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人脂磷壁酸(LTA)酶联免疫分析

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563

脂磷壁酸(LTA) 酶联免疫 分析

试剂 盒使用说明书

本试剂仅供研究使用 目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中脂磷壁酸(LTA)的含量。

实验原理

本试剂盒应用 双抗体 夹心法测定 标本 脂磷壁酸(LTA) 水平。用纯化的 脂磷壁酸(LTA) 抗体 包被微孔板,制成固相 体,往包被 单抗 的微孔中加入 脂磷壁酸(LTA) ,再与<font>HRP</font> <font>标记的</font> 脂磷壁酸(LTA) 抗体结合,形成抗体<font>-</font> <font>抗原</font> <font>-</font> <font>酶标抗体复合物</font> ,经过彻底洗涤后 底物<font>TMB</font> <font>显色。</font> <font>TMB</font> <font>在</font> HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 脂磷壁酸(LTA) 呈正相关。用酶标仪在 450 nm<font>波长下测定吸光度(</font> <font>OD</font> <font>值),</font> 通过标准曲线 计算样品 脂磷壁酸(LTA) 的含量。

试剂盒组成

试剂盒组成

48<font>孔配置</font>

96<font>孔配置</font>

保存

说明书

1<font>份</font>

1<font>份</font>

封板膜

2<font>片(</font> <font>48</font> <font>)</font>

2<font>片(</font> <font>96</font> <font>)</font>

密封袋

1<font>个</font>

1<font>个</font>

酶标包被板

1 ×<font>48</font>

1 ×<font>96</font>

2-8<font>℃保存</font>

标准品: 450 p g/ ml

0.5ml<font>×</font> <font>1</font> <font>瓶</font>

0.5ml<font>×</font> <font>1</font> <font>瓶</font>

2-8<font>℃保存</font>

标准品稀释液

1.5ml<font>×</font> <font>1</font> <font>瓶</font>

1.5ml<font>×</font> <font>1</font> <font>瓶</font>

2-8<font>℃保存</font>

酶标试剂

3 ml<font>×</font> <font>1</font> <font>瓶</font>

6 ml<font>×</font> <font>1</font> <font>瓶</font>

2-8<font>℃保存</font>

样品稀释液

3 ml<font>×</font> <font>1</font> <font>瓶</font>

6 ml<font>×</font> <font>1</font> <font>瓶</font>

2-8<font>℃保存</font>

显色剂<font>A</font> <font>液</font>

3 ml<font>×</font> <font>1</font> <font>瓶</font>

6 ml<font>×</font> <font>1</font> <font>瓶</font>

2-8<font>℃保存</font>

显色剂<font>B</font> <font>液</font>

3 ml<font>×</font> <font>1</font> <font>瓶</font>

6 ml<font>×</font> <font>1</font> <font>瓶</font>

2-8<font>℃保存</font>

终止液

3ml<font>×</font> <font>1</font> <font>瓶</font>

6ml<font>×</font> <font>1</font> <font>瓶</font>

2-8<font>℃保存</font>

浓缩洗涤液

(<font>20ml</font> <font>×</font> <font>20</font> <font>倍)×</font> <font>1</font> <font>瓶</font>

(<font>20ml</font> <font>×</font> <font>30</font> <font>倍)×</font> <font>1</font> <font>瓶</font>

2-8<font>℃保存</font>

样本处理及要求

1. <font>血清:室温血液自然凝固</font> <font>10-20</font> <font>分钟,离心</font> <font>20</font> <font>分钟左右(</font> <font>2000-3000</font> <font>转</font> <font>/</font> <font>分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。</font>

2. <font>血浆:应根据标本的要求选择</font> <font>EDTA</font> <font>或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合</font> <font>10-20</font> <font>分钟后,离心</font> <font>20</font> <font>分钟左右(</font> <font>2000-3000</font> <font>转</font> <font>/</font> <font>分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。</font>

3. <font>尿液:用无菌管收集,离心</font> <font>20</font> <font>分钟左右(</font> <font>2000-3000</font> <font>转</font> <font>/</font> <font>分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。</font>

4. <font>细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心</font> <font>20</font> <font>分钟左右(</font> <font>2000-3000</font> <font>转</font> <font>/</font> <font>分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用</font> <font>PBS</font> <font>(</font> <font>PH7.2-7.4</font> <font>)稀释细胞悬液,细胞浓度达到</font> <font>100</font> <font>万</font> <font>/ml</font> <font>左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心</font> <font>20</font> <font>分钟左右(</font> <font>2000-3000</font> <font>转</font> <font>/</font> <font>分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。</font>

5. <font>组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的</font> <font>PBS</font> <font>,</font> <font>PH7.4</font> <font>。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持</font> <font>2-8</font> <font>℃的温度。加入一定量的</font> <font>PBS</font> <font>(</font> <font>PH7.4</font> <font>),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心</font> <font>20</font> <font>分钟左右(</font> <font>2000-3000</font> <font>转</font> <font>/</font> <font>分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。</font>

6. <font>标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可</font> 将标本放于 -20 ℃保存,但 避免反复冻融 .

7. 不能检测含NaN3的样品 ,因<font>NaN3</font> <font>抑制辣根过氧化物酶的(</font> <font>HRP</font> <font>)活性。</font>

操作步骤:

1. 标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔<font>10</font> <font>孔,在第一、第二孔中分别加标准品</font> <font>100</font> μ l<font>,然后在第一、第二孔中加标准品稀释液</font> <font>50</font> μ l<font>,混匀;然后从第一孔、第二孔中各取</font> <font>100</font> μ l<font>分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液</font> <font>50</font> μ l<font>,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取</font> <font>50</font> μ l<font>弃掉,再各取</font> <font>50</font> μ l<font>分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液</font> <font>50ul</font> <font>,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取</font> <font>50</font> μ l<font>分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液</font> <font>50</font> μ

l<font>,混匀后从第七、第八孔中分别取</font> <font>50</font> μ l<font>加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液</font> <font>50</font> μ l<font>,混匀后从第九第十孔中各取</font> <font>50</font> μ l<font>弃掉。(稀释后各孔加样量都为</font> <font>50</font> μ l<font>,浓度分别为</font> <font>300 </font> p g/ ml ,<font>200</font> p g/ ml ,<font>100 </font> p g/ ml ,<font>50</font> p g/ ml ,<font>25</font> p g/ ml )。

2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、 待测样品孔 。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液<font>40</font> μ l<font>,然后再加待测样品</font> <font>10</font> μ l<font>(样品最终稀释度为</font> <font>5</font> <font>倍)。</font> 加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁, 轻轻 晃动 混匀

3. 温育:用封板膜封板后置<font>37</font> ℃温育3 0 分钟

4. 配液:将<font>30</font> <font>(</font> <font>48T</font> <font>的</font> <font>20</font> <font>倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水</font> <font>30</font> <font>(</font> <font>48T</font> <font>的</font> <font>20</font> <font>倍)倍稀释后备用。</font>

5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体, 甩干 ,每孔加满洗涤液,静置<font>30</font> <font>秒后弃去,如此重复</font> <font>5</font> <font>次,拍干。</font>

6. 加酶:每孔加入酶标试剂<font>50</font> μ l<font>,空白孔除外</font>

7. 温育:操作同<font>3</font> <font>。</font>

8. 洗涤:操作同<font>5</font> <font>。</font>

9. 显色:每孔先加入显色剂<font>A50</font> μ l<font>,再加入显色剂</font> <font>B50</font> μ l<font>,轻轻震荡混匀,</font> <font>37</font> ℃避光显色15分钟.

10. 终止:每孔加终止 液<font>50μl</font> <font>,终止反应</font> (此时蓝色立转黄色)

11. 测定:以空白空调零, 4 50 nm<font>波长依序测量各孔的</font> 吸光 度(<font>OD</font> <font>值)</font> 测定应在加终止液后<font>15</font> <font>分钟以内进行。</font>

注意事项:

1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡<font>15-30</font> <font>分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。</font>

2. 浓洗涤液 可能 会有 结晶 析出,稀释时可在水浴中加温助溶 ,洗涤时不影响结果。

3. 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在<font>5</font> <font>分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。</font>

4. 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本<font>OD</font> <font>值大于标准品孔第一孔的</font> <font>OD</font> <font>值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(</font> <font>n</font> <font>倍)后再测定,计算时请最后</font> 乘以 总稀释倍数( ×n×5 )。

5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6. 底物请避光保存。

7. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准<font>.</font>

8. 所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9. 本试剂不同批号组分不得混用。

10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。

计算

以标准物的浓度为横坐标,<font>OD</font> <font>值为纵坐标,</font>

在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的<font>OD</font>

值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以 稀释

倍数 ;或用标准物的浓度与<font>OD</font> <font>值计算出标</font>

准曲线的直线回归方程式,将样品的<font>OD</font> <font>值</font>

代入方程式,计算出样品浓度,再乘以 稀释

倍数 ,即为样品的实际浓度。

(此图仅供参考)

试剂盒性能:

1.<font>样品线性回归与预期浓度相关系数</font> <font>R</font> <font>值为</font> <font>0.95</font> <font>以上。</font>

2.<font>批内与批见应分别小于</font> <font>9%</font> <font>和</font> <font>11%</font>

保存条件及有效期:

1.<font>试剂盒保存:</font> ;<font>2-8</font>

2<font>.有效期:</font> <font>6</font> <font>个月</font>

---------------------------------------------------------------------------------- Shanghai Yueyan Biological Technology Co.,Ltd

Address:Room1104,No.9Building,Ning Guo Road No313,YangPu District,Shanghai,China.

Tel:+86-021-55785280 55785281

Fax:+86-021-55785279

E-mail:biolzy@yahoo.cn

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