微生物染色液配制及染色法

<font>2.3　耐酸性染色法(萎－倪二氏法)<br /> 2.3.1　石炭酸品红染色液<br /> 碱性品红　　　　　　 0.3g<br /> 95%乙醇　　　　　　　10mL<br /> 5%酚水溶液　　　　　 90mL<br /> 将品红溶解于乙醇中，然后与酚溶液混合。<br /> 2.3.2　3%盐酸－乙醇<br /> 浓盐酸　　　　　　　 3mL<br /> 95%乙醇　　　　　　　97mL<br /> 2.3.3　复染液<br /> 吕氏碱性美蓝染色液。<br /> 2.3.4　染色法<br /> 2.3.4.1　将涂片在火焰上加热固定，滴加石炭酸品红染色液，徐徐加热至有蒸气出现，但切 不可使沸腾。染液如因蒸发减少时，应随时添加。染5min，倾去染液，水洗。<br /> 2.3.4.2　滴加盐酸－乙醇脱色，直至无红色脱落为止(所需时间视涂片厚薄而定，一般为1～3min)，水洗。<br /> 2.3.4.3　滴加吕氏碱性美蓝染色液，复染30s～1min，水洗，待干，镜检。<br /> 2.3.5　结果：耐酸性细菌呈红色，其他细菌、细胞等物质呈蓝色。</font>

<font>2.4　柯氏染色法<br /> 2.4.1　染色液<br /> 2.4.1.1　0.5%沙黄液。<br /> 2.4.1.2　0.5%孔雀绿液。<br /> 2.4.2　染色法<br /> 2.4.2.1　将涂片在火焰上固定，滴加0.5%沙黄液，并加热至出现气泡，约2～3min，水洗。<br /> 2.4.2.2　滴加0.5%孔雀绿液，复染40～50s。水洗，待干，镜检。<br /> 2.4.3　结果<br /> 布氏杆菌呈红色，其他细菌及细胞呈绿色。</font>

<font>2.5　奥尔特氏荚膜染色法<br /> 2.5.1　染色液<br /> 沙黄　　　　　　　　　　 3g<br /> 蒸馏水　　　　　　　　　 100mL<br /> 用乳钵研磨溶解。<br /> 2.5.2　染色法<br /> 将涂片在火焰上固定，滴加染色液，并加热至产生蒸气后，继续染3min。水洗，待干，镜检。<br /> 2.5.3　结果<br /> 炭疽芽胞杆菌菌体呈赤褐色，荚膜呈黄色。</font>

<font>2.7　鞭毛染色法<br /> 2.7.1　染色液的配制<br /> 2.7.1.1　甲液：称丹宁酸5g、氯化高铁(FeCl3)1.5g，溶于100mL蒸馏水中，待溶解后加入1%的氢氧化钠溶液1mL和15%的甲醛溶液2mL。<br /> 2.7.1.2　乙液：称2g硝酸银溶于100mL蒸馏水中。<br /> 在90mL乙液中滴加浓氢氧化铵溶液，到出现沉淀后，再滴加使其变为澄清，然后用其余10mL乙液小心滴加至澄清液中，至出现轻微雾状为止(此为关键性操作，应特别小心)。滴加氢氧化铵和用剩余乙液回滴时，要边滴边充分摇荡，染液当天配，当天使用，2～3d基本无效。<br /> 2.7.2　染色法<br /> 在风干的载玻片上滴加甲液，4～6min后，用蒸馏水轻轻冲净。再加乙液，缓缓加热至冒汽，维持约半分钟(加热时注意勿使出现干燥面)。在菌体多的部位可呈深褐色到黑色，停止加热，用水冲净，干后镜检，菌体及鞭毛为深褐色到黑色。<br /> 2.8　碱性复红染色法<br /> 将0.5g碱性复红染料溶解于20mL95%乙醇中，然后用蒸馏水稀释至100mL。如有不溶物时，可用滤纸过滤，或静置后取上清液备用。<br /> 注：本染色液系用于苏云金芽胞内蛋白质毒素结晶的染色，藉以与蜡样芽胞杆菌相区别</font>