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各种组织特殊染色法—细菌染色法

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细菌是一类具有细胞壁的单细胞微生物。它形体微小,结构简单,无典型的细胞核,只有核质,无核膜和模仁不进行有丝分裂,除核蛋白体外无其他细胞器,在生物学分类上属于原生生物界中的原核细胞型.
(一)细菌的形态
细菌的种类很多,形态各异,但归纳起来,基本上只有三种形状,即球形、杆形和螺形。
(二)细菌的基本结构
细菌由细胞壁、细胞膜、细胞浆和核质核成。细胞壁的主要成分为肽聚糖;细胞膜的主要成分为磷脂,细胞浆中的主要成分是水、蛋白质、核酸和脂类物;核质的主要成分为DNA。在病理技术中,与病理技术相关的是细菌的细胞壁,细胞壁上结构的变化是将其显示出来的关键。
(三)细菌的特殊结构
细菌除了上述的基本结构以外,能够显示出各种细菌的特性和形状的是他的特殊结构,根据细菌的特殊结构,就可以辨认出不同种类的细菌素。它的特殊结构是鞭膜、鞭毛、菌毛、芽胞[9]。
(四)Warthin-Starry法显示幽门弯曲菌
(1)操作方法:
①切片脱蜡至水。
②醋酸盐缓冲液冲洗切片2次,1分钟/次。
③入1%硝酸银水溶液(预热达60℃)处理切片60分钟,在烤箱中进行。
④于显影液中(60℃烤箱)3分钟,镜下控制,如果没达到要求,还可继续延长时间,直到合适为止。
⑤ 取出切片,用60℃热水洗切片。
⑥缓冲液洗切片。
⑦脱水,透明,封固。
结果:胃腺上皮或腺腔内表面,胃幽门弯曲菌显示棕黄至棕黑色,HP可散在出现,也可成团出现,其余组织及背景显示棕黄色。
(2)甲苯胺蓝染色法
①切片脱腊至水。
②蒸馏水浸洗3次。
③0.1%甲苯胺蓝液浸染10min。
④水洗,洗去多余染液。
⑤各级酒精脱水。
⑥二甲苯透明,中性树胶封固。
结果:在胃粘膜腺上皮表面,腺腔内均可见到幽并肩战斗让螺杆菌(HP),有的呈弯曲杆状或逗点状,HP可散在出现,也可成团聚集出现,这要根据不同病例而异。
试剂 的配制:称取0.1g甲苯胺蓝,溶于100ml 0.1M醋酸盐缓冲液中,置室温5天后,即可使用染液于室温下可保存3个月,若放于4℃冰箱则可保存半年左右,但该液的染色效果在早期为最佳,若染液存放时间较长,则染色偏淡,应适应延长染色时间。
试剂 配制:
醋酸缓冲液(PH3.6)
醋酸钠 1.64g
醋 酸 2.5ml
蒸馏 水 凑足200ml
2.1%硝酸银液
硝酸银 1g
醋酸盐缓冲液(PH3.6)凑足100ml

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