丁香实验_LOGO
登录
提问
我要登录
|免费注册
点赞
收藏
wx-share
分享

蛙排精实验,跌卵实验

互联网

1750
相关专题
 

 

蛙排精实验,跌卵实验

 

目的原理 了解妊娠试验的原理,掌握操作技术。人妊娠后,胎盘分泌的绒毛膜促性腺激素(HCG)在尿中的浓度逐步升高,至60天左右达到高峰以后逐步减少,而HCG可刺激雄蛙(或蟾蜍)排精,因此利用雄蛙排精作为指标,测出尿中HCG作为诊断早期妊娠一项检验方法。了解垂体促性腺激素和人绒毛膜促性腺素对蛙卵的影响,掌握跌卵方法,可进行激素效价的测定。

高等脊椎动物脑垂体前叶和鱼类脑垂体间叶,具有两种促性腺激素,一是促滤泡激素(FSH),主要对性腺发育、成熟有促进作用;另一种是促黄体生成素(LH),主要是促进排卵,人绒毛膜促性腺激素(HCG)也有促进排卵的作用。利用这两种激素进行对蛙卵的跌卵实验,可测定其激素的效价。上述激素至今仍是家鱼人工催产药物。

实验对象与用品 雄蛙(或蟾蜍),雌蛙。滴管、载玻片、显微镜、手术器械,50mL广口瓶、特制玻璃钩,蛙板注射器、注射针头;二月左右孕尿、非孕尿,鲤鱼脑垂体、HCG,任氏液、生理盐水等。

方法步骤

(一)蛙排精实验

1.选两只体重在30克 以上的雄蛙或蟾蜍。用滴管分别从其泄殖腔内吸少量液体滴在载玻片上,在低倍下观察有无精子存在(有则另选蛙)。

2.其中一只用非孕尿(或生理盐水)2-5mL注入背部淋巴作对照,另一只则注射等量的孕尿(或300U/mL HCG)。

3.待l-2h后,分别从泄殖腔吸出液体,在显微镜下检查,发现精子后盖上盖玻片,再用高倍镜观察精子的形态。若实验组有精子活动,则为阳性反应,说明已孕,反之为阴性反应。

(二)蛙跌卵实验

1.鱼脑垂体溶液制备:取经丙酮浸泡、干燥的鲤鱼脑垂体1mg和0.5mg,分别放在研钵中研成粉末,用任氏液溶解,并稀释至30mL,分别放入两个广口瓶中(贴上标签)。

2.HCG溶液的制备:称取1mg、2mg的HCG分别放入广口瓶中,并加30mL任氏液溶解。

3.取低温保存的雌蛙一只,破坏脑与脊髓。固定在蛙板上,剖腹取出卵巢。卵巢应饱满,卵粒呈黑色,有光泽,大小基本—致。

4.用任氏液洗涤卵巢,洗去血液。并用剪刀剪下五块大小相等的卵巢,每块卵巢含卵约100粒。用玻璃钩钩住卵巢膜,悬吊于四个含有鲤鱼脑垂体和HCG的广口瓶中和一个空白任氏液广口瓶内。卵巢块必须浸在液面之下溶液的中部,将瓶置于20℃ 温箱内。

5.24h后检查:每块卵巢的含卵数及跌卵数,求出百分比。

6.若作激素效价测定时,只能配制所测激素一种溶液,而且激素浓度要有多个梯度。若空白对照组无卵跌落,某些激素浓度组出现跌卵数达50%以上者,则试验结果正常,跌卵数达50%以上的最低激素量,即为该激素的效价。若空白对照组有卵跌落,或出现两组差异很大,或试验组跌卵数在50%以下,均属不正常,应重新做。

注意事项

1.取用的滴管其口应光滑,以免损伤组织。

2.泄殖腔有无原生动物,观察时与精子区别。

3.如泄殖腔液体较少。可先注入少量生理盐水,然后再吸出。

4.作蛙或蟾蜍背部淋巴束注射时,针头应从后肢刺入,否则尿液从针孔流出。

5.判断雄蛙或蟾蜍最简单方法,用拇指和食指向它的腹侧一压,如果雄的常常叫一声,不叫的为雌性,另外下额外两侧有鼓起的鸣囊为雄性,雌性蛙没有鸣囊。

提问
扫一扫
丁香实验小程序二维码
实验小助手
丁香实验公众号二维码
扫码领资料
反馈
TOP
打开小程序