蛙排精实验，跌卵实验

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蛙排精实验，跌卵实验

 

目的原理 了解妊娠试验的原理，掌握操作技术。人妊娠后，胎盘分泌的绒毛膜促性腺激素（HCG）在尿中的浓度逐步升高，至60天左右达到高峰以后逐步减少,而HCG可刺激雄蛙（或蟾蜍）排精，因此利用雄蛙排精作为指标，测出尿中HCG作为诊断早期妊娠一项检验方法。了解垂体促性腺激素和人绒毛膜促性腺素对蛙卵的影响，掌握跌卵方法，可进行激素效价的测定。

高等脊椎动物脑垂体前叶和鱼类脑垂体间叶，具有两种促性腺激素，一是促滤泡激素(FSH)，主要对性腺发育、成熟有促进作用；另一种是促黄体生成素(LH)，主要是促进排卵，人绒毛膜促性腺激素（HCG）也有促进排卵的作用。利用这两种激素进行对蛙卵的跌卵实验，可测定其激素的效价。上述激素至今仍是家鱼人工催产药物。

实验对象与用品 雄蛙(或蟾蜍)，雌蛙。滴管、载玻片、显微镜、手术器械，50mL广口瓶、特制玻璃钩，蛙板注射器、注射针头；二月左右孕尿、非孕尿，鲤鱼脑垂体、HCG，任氏液、生理盐水等。

方法步骤

（一）蛙排精实验

1.选两只体重在30克 以上的雄蛙或蟾蜍。用滴管分别从其泄殖腔内吸少量液体滴在载玻片上，在低倍下观察有无精子存在(有则另选蛙)。

2.其中一只用非孕尿(或生理盐水)2-5mL注入背部淋巴作对照，另一只则注射等量的孕尿(或300U/mL HCG)。

3.待l-2h后，分别从泄殖腔吸出液体，在显微镜下检查，发现精子后盖上盖玻片，再用高倍镜观察精子的形态。若实验组有精子活动，则为阳性反应，说明已孕，反之为阴性反应。

（二）蛙跌卵实验

1.鱼脑垂体溶液制备：取经丙酮浸泡、干燥的鲤鱼脑垂体1mg和0.5mg，分别放在研钵中研成粉末，用任氏液溶解，并稀释至30mL，分别放入两个广口瓶中(贴上标签)。

2.HCG溶液的制备：称取1mg、2mg的HCG分别放入广口瓶中，并加30mL任氏液溶解。

3.取低温保存的雌蛙一只，破坏脑与脊髓。固定在蛙板上，剖腹取出卵巢。卵巢应饱满，卵粒呈黑色，有光泽，大小基本—致。

4.用任氏液洗涤卵巢，洗去血液。并用剪刀剪下五块大小相等的卵巢，每块卵巢含卵约100粒。用玻璃钩钩住卵巢膜，悬吊于四个含有鲤鱼脑垂体和HCG的广口瓶中和一个空白任氏液广口瓶内。卵巢块必须浸在液面之下溶液的中部，将瓶置于20℃ 温箱内。

5.24h后检查：每块卵巢的含卵数及跌卵数，求出百分比。

6.若作激素效价测定时，只能配制所测激素一种溶液，而且激素浓度要有多个梯度。若空白对照组无卵跌落，某些激素浓度组出现跌卵数达50％以上者，则试验结果正常，跌卵数达50％以上的最低激素量，即为该激素的效价。若空白对照组有卵跌落，或出现两组差异很大，或试验组跌卵数在50%以下，均属不正常，应重新做。

注意事项

1.取用的滴管其口应光滑，以免损伤组织。

2.泄殖腔有无原生动物，观察时与精子区别。

3.如泄殖腔液体较少。可先注入少量生理盐水，然后再吸出。

4.作蛙或蟾蜍背部淋巴束注射时，针头应从后肢刺入，否则尿液从针孔流出。

5.判断雄蛙或蟾蜍最简单方法，用拇指和食指向它的腹侧一压，如果雄的常常叫一声，不叫的为雌性，另外下额外两侧有鼓起的鸣囊为雄性，雌性蛙没有鸣囊。