SDS-PAGE凝胶制实验及其各实验试剂的配制方法

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SDS-PAGE 凝胶制备属于实验室最常规的操作了，刚开始做蛋白实验总是在找凝胶配制实验中所用试剂的配方，这里总结了分离胶、浓缩胶、分离胶和浓缩胶缓冲液、考马斯亮蓝染液、样品缓冲液、电泳缓冲液等配方。

1. 分离胶(12%)

配制	所需试剂	所需体积
分离胶(12％)	30％丙烯酰胺	6.0 ml
1.5 mol/l Tris-HCl	3.8 ml
10%SDS	150 μl
10%过硫酸铵	150 μl
TEMED	6 μl
蒸馏水	4.9 ml

2. 浓缩胶(5%)

配制	所需试剂	所需体积
浓缩胶(5％)	30％丙烯酰胺	1.3 ml
1.5 mol/l Tris-HCl	1.0 ml
10%SDS	80 μl
10%过硫酸铵	80 μl
TEMED	8 μl
蒸馏水	5.5 ml

3. 分离胶缓冲液(pH8.9)

配制	所需试剂	所需体积
分离胶缓冲液	Tris	36.6 g
1 mol/l HCl	48 ml
蒸馏水	补足至100 ml

4. 浓缩胶缓冲液(pH6.7)

配制	所需试剂	所需体积
浓缩胶缓冲液（pH6.7）	Tris	5.98 g
1 mol/l HCl	48 ml
蒸馏水	补足至100 ml

5. 30%丙烯酰胺(pH≤7.0)

配制	所需试剂	所需体积
30%丙烯酰胺（pH≤7.0）	丙烯酰胺	29 g
甲叉-双丙烯酰胺	1 g
蒸馏水	补足至100 ml

6. 10%过硫酸铵(W/V)：1g过硫酸铵溶于10ml水中，4℃保存数周，尽量现用现配。

7. 10%SDS：将10 g SDS溶于80ml重蒸水中并轻缓搅拌(室温低时需水浴加热溶解)，再定容至100ml，室温存放。

8. 样品缓冲液

配制	所需试剂	所需体积
样品缓冲液	1 M Tris-HCl（pH6.7）	5 ml
SDS	2.5 g
巯基乙醇	1 ml
溴酚兰	0.05 g
蔗糖	10 g
蒸馏水	补足至100ml

9. 考马斯亮蓝染色液：0.25g考马斯亮蓝R-250用少量甲醇溶解后，用甲醇(40ml)-乙酸(10ml)水溶液稀释至100ml。

10. Tris-甘氨酸电泳缓冲液(pH8.3)

配制	所需试剂	所需体积
Tris-甘氨酸 电泳缓冲液（pH8.3）	Tris碱	15.1 g
甘氨酸	94 g
10％（W/V）SDS	50 ml
去离子水	补足至100 ml

凝胶配制所需试剂的母液不能放置太久，有条件的实验室可将母液保存在4度冰箱中，放置母液被微生物 污染或者出现沉淀。