SDS-PAGE凝胶制实验及其各实验试剂的配制方法
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SDS-Page 凝胶制备属于实验室最常规的操作了,刚开始做蛋白实验总是在找凝胶配制实验中所用试剂的配方,这里总结了分离胶、浓缩胶、分离胶和浓缩胶缓冲液、考马斯亮蓝染液、样品缓冲液、电泳缓冲液等配方。
1. 分离胶(12%)
配制 | 所需试剂 | 所需体积 |
分离胶(12%) | 30%丙烯酰胺 | 6.0 ml |
1.5 mol/l Tris-HCl | 3.8 ml | |
10%SDS | 150 μl | |
10%过硫酸铵 | 150 μl | |
TEMED | 6 μl | |
蒸馏水 | 4.9 ml |
2. 浓缩胶(5%)
配制 | 所需试剂 | 所需体积 |
浓缩胶(5%) | 30%丙烯酰胺 | 1.3 ml |
1.5 mol/l Tris-HCl | 1.0 ml | |
10%SDS | 80 μl | |
10%过硫酸铵 | 80 μl | |
TEMED | 8 μl | |
蒸馏水 | 5.5 ml |
3. 分离胶缓冲液(pH8.9)
配制 | 所需试剂 | 所需体积 |
分离胶缓冲液 | Tris | 36.6 g |
1 mol/l HCl | 48 ml | |
蒸馏水 | 补足至100 ml | |
4. 浓缩胶缓冲液(pH6.7)
配制 | 所需试剂 | 所需体积 |
浓缩胶缓冲液(pH6.7) | Tris | 5.98 g |
1 mol/l HCl | 48 ml | |
蒸馏水 | 补足至100 ml | |
5. 30%丙烯酰胺(pH≤7.0)
配制 | 所需试剂 | 所需体积 |
30%丙烯酰胺(pH≤7.0) | 丙烯酰胺 | 29 g |
甲叉-双丙烯酰胺 | 1 g | |
蒸馏水 | 补足至100 ml | |
6. 10%过硫酸铵(W/V):1g过硫酸铵溶于10ml水中,4℃保存数周,尽量现用现配。
7. 10%SDS:将10 g SDS溶于80ml重蒸水中并轻缓搅拌(室温低时需水浴加热溶解),再定容至100ml,室温存放。
8. 样品缓冲液
配制 | 所需试剂 | 所需体积 |
样品缓冲液 | 1 M Tris-HCl(pH6.7) | 5 ml |
SDS | 2.5 g | |
巯基乙醇 | 1 ml | |
溴酚兰 | 0.05 g | |
蔗糖 | 10 g | |
蒸馏水 | 补足至100ml |
9. 考马斯亮蓝染色液:0.25g考马斯亮蓝R-250用少量甲醇溶解后,用甲醇(40ml)-乙酸(10ml)水溶液稀释至100ml。
10. Tris-甘氨酸电泳缓冲液(pH8.3)
配制 | 所需试剂 | 所需体积 |
Tris-甘氨酸 电泳缓冲液(pH8.3) | Tris碱 | 15.1 g |
甘氨酸 | 94 g | |
10%(W/V)SDS | 50 ml | |
去离子水 | 补足至100 ml | |
凝胶配制所需试剂的母液不能放置太久,有条件的实验室可将母液保存在4度冰箱中,放置母液被微生物 污染或者出现沉淀。