新型的基因分型技术(SNP分型):巢式PCR

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随着生命科学迅猛的发展，与之相适应的实验技术手段越来越复杂和专业化，对于科研人员实验技能要求也越来越高。由于生物学实验高度的复杂性、使得一个科研人员往往只能精通某一方向的实验。因此许多生物技术公司应孕而生，他们提供了许多专业的服务，其中最常规的技术服务包括核酸、蛋白测序 、引物合成，SNP分型,动物培养及转基因动物实验。

在国外，生命科学的研究已经初步形成了一个大型技术平台共享的研究形式，科研人员的主要工作是进行实验方案的设计、若干实验和实验数据的分析工作，而大量的基础性的实验工作则由相应的技术公司来完成，据不完全统计，2004年全美60%的SNP 分型工作就是外包的生物技术公司完成。因为专业的技术公司在各自领域有着雄厚的技术背景和丰富的实验经验，试验成功率更高,实验数据也更可靠，这样科研人员也能够将主要精力放在真正的科研－实验设计和数据分析中去。

出具有针对性的SNP分型技术，“巢式PCR-RFLP”基因分型技术，不同于传统的只能对于有酶切位点的传统的SNP分型的技术，本公司开发的“巢式PCR-RFLP是针对任意的基因分型技术，使任何位点最终都能进行常规限制性内切酶 鉴定；同时该SNP分型技术利用巢式PCR技术，使得多个位点同时进行分析称为可能。即使低浓度的DNA也能够进行快速准确的分型工作。 与现有常规的分型技术相比，其最大的优势包括：
(一)所需DNA浓度低。1-2ng/uL也能完成检测工作，而Taqman技术所需的DNA含量至少5ng/uL。
(二)价格低。由于不需要合成荧光探针 ，使得该技术比Taqman技术价格低，该优势在对多个位点同时进行分型时更明显。

与Taqman技术和普通技术的详细对比

分型技术 PCR -RFLP技术 Taqman技术 普通PCR-RFLP技术

最佳运用时机 200-600样本，任何DNA多态位点 样本量大于500人份 仅适合含有现成酶切位点的多态位点的分型

试剂投入 低 荧光探针，需3000-4000元。有可能实验失败需重新花钱设计荧光探针。 低

技术的适用性 可适合任何多态位点的分型 基本适合任何多态位点的分型，但有时若干位点不能成功进行试验；当分型位点过于接近也不能用该方法。 仅适合含有现成酶切位点的多态位点的分型，有时出现的是一些稀有酶的酶切位点，导致效率低下或费用昂贵；

结果判断 直观，明确，稳定 间接，每管反应必须加荧光参照ROX，否则结果判断不确定 一般直观，明确；有时酶切位点出现在非主频等位基因上，导致结果判读困难

结果稳定性 稳定 一般 稳定

结果准确性 准确度高 一般 准确度高

样本消耗量 1-2ng 5-10ng 50－100ng

实验耗时 2-3周 由于要定制MGB荧光探针，和预实验，也需要2-3周 2-3周

　操作流程　
1．基本信息收集具体内容包括客户信息、样本数(case,control)数、位点信息等。　
2 位点信息的查询 主要包括：2.1 位点上下游各300bp的确切序列，基因频度;2.2 有无文献报道证明该位点多态存在于中国人群;2.3 如无上述相关文献,在J-SNP数据库中查询该位点多态是否存在于东亚人群中。为了保证结果的可靠，实验方案设计原则上应以野生型进行酶切鉴定，因此确认snp的频度是非常重要的。