外源质粒DNA转化大肠杆菌介绍

相关专题

DNA连接与转化 质粒

转化是将外源DNA分子 通过物理或化学的方法导入基因工程 细菌 中的过程,是基因工程 等研究领域的基本实验技术之一.

外源质粒 DNA转化 大肠杆菌

1 实验简介

转化是将外源DNA分子通过物理或化学的方法导入基因工程细菌中的过程,是基因工程等研究领域的基本实验技术之一.现演示利用化学的方法(热击法)：使用化学试剂(如CaCl2)制备的感受态细胞,通过热击处理将载体 DNA分子导入大肠杆菌细胞中.

实验中使用的主要仪器：电热恒温水槽 超净工作台 台式离心机 电热恒温震荡器 电热恒温培养箱

2 热击

DNA连接 产物与大肠杆菌感受态细胞冰浴30min后,放置42摄氏度水浴锅中,热击90秒,后迅速将大肠杆菌转移到冰水中放置2-3min.

3 大肠杆菌复苏

上步热击后,一般都要对菌体进行一次复苏过程,向热击加入600-800 ul37摄氏度预热的无抗生素LB培养基后,置于摇床上37氏度,150rpm复苏培养45～60min.

4 涂板培养

复苏后,收集的菌体去除部分上清液,预留100ul左右的菌液悬浮,用移液枪将重悬的菌加到抗性固体LB培养基中,用涂棒将菌涂布均匀,37摄氏度倒置培养12小时.