外源质粒DNA转化大肠杆菌

外源质粒 DNA 转化 大肠杆菌

1 实验简介

转化是将外源DNA分子通过物理或化学的方法导入基因工程 细菌 中的过程,是基因工程等研究领域的基本实验技术之一.现演示利用化学的方法(热击法)：使用化学试剂(如CaCl2)制备的感受态细胞,通过热击处理将载体DNA分子导入大肠杆菌细胞中.

实验中使用的主要仪器：电热恒温水槽 超净工作台 台式离心机 电热恒温震荡器 电热恒温 培养箱

2 热击

DNA连接产物与大肠杆菌 感受态细胞 冰浴30min后,放置42摄氏度水浴锅中,热击90秒,后迅速将大肠杆菌转移到冰水中放置2-3min.

3 大肠杆菌复苏

上步热击后,一般都要对菌体进行一次复苏过程,向热击加入600-800 ul37摄氏度预热的无 抗生素 LB培养基 后,置于 摇床 上37氏度,150rpm复苏培养45～60min.

4 涂板培养

复苏后,收集的菌体去除部分上清液,预留100ul左右的菌液悬浮,用移液枪将重悬的菌加到抗性固体LB培养基中,用涂棒将菌涂布均匀,37摄氏度倒置培养12小时.