大肠杆菌外源蛋白表达。

uuzq

2023-01-02

各位大佬，我用大肠杆菌BL21（DE3）表达外源基因，用的pRSFDuet质粒，T7启动子，用1mMIPTG诱导25℃过夜，跑SDS没有发现目的条带，外源基因插入的位点也是参考的文献，做了密码子优化，不知道是啥原因，插入的两个基因都没表达

dxy_0mli503w

2023-01-26

有帮助

确实是要先测序的，一般来说实验室做好之后都会先送给公司帮忙测序，得到序列之后自己先分析一遍，是否与设计组有偏差，正反双链是否有问题，引物启动子序列表达是否有问题，确定了这些之后才会进行下一步。

土井挞克树

2023-01-04

有帮助

可以尝试更换引物，有的时候引物不正确基因也不表达。

简简单单的8872

2023-01-03

有帮助

序列插入后是否测序？测序正确才可用于表达。若测序无误，可尝试降低IPTG 浓度

bamboopiggy

2023-01-03

有帮助

先确定你的质粒构建没有问题，尤其是在质粒的插入位点。

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