如何让ABI测序仪更好地为实验服务？

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ABI公司推出的310型测序 仪具有应用广泛、自动化程度高、全自动电脑控制等特点，一经上市即得到广大科研用户的认同。本文介绍其具体的日常清洁维护和实验操作方法。

一.Pump Block的清洁及维护

在机器运行前，必须确认Pump Block是干净的，使用POP-6测序 时，注意POP-6室温下4天须更换。

1. 打开310主机，然后打开Macintosh微机， 打开Data Collection软件 。

2. 在Instrument菜单下，选择manual control。

3. 选中syringe home，点execute执行。

4. 取下1ml玻璃注射器，去离子水 洗净，晾干。

5. 松开capillary fitting，取下毛细管。

6. 取下buffer reservior

7. 双手执稳pump block，均匀用力，将其径直拔出。

8. 取5ml塑料注射器，用去离子水 反复清洗pump block，特别注意管路的清洗。

9. 晾干后装上block，并装上毛细管。

二.安装毛细管，灌胶

1. 从4°C冰箱取出POP-6胶，室温回温30分钟。

2. 吸取少量 POP-6，将注射器来回抽动几次使胶浸润注射器内壁，然后将胶排净。

3. 吸取POP-6适量(≈0.2ml)，用DI H2O洗净注射器外壁，擦干，于Pump Block 右侧上紧。将胶放回4°C冰箱。

4. 重新装好毛细管。

5. 进入Manual Control菜单，关闭缓冲阀门(Buffer Valve Close)，松开废液阀门, 手指压注射器排净管道中气泡，关上阀门(Buffer Valve Close)。

6. 进入Manual Control菜单，打开缓冲阀门(Buffer Valve Open), 同样方法排净管道中气泡，然后关闭缓冲阀门。

7. 松开capillary fitting，排净毛细管一侧的气泡，关紧fitting，注意毛细管顶端位于管路十字架的右边缘。

8. 将毛细管固定于检测窗口holder处，注意毛细管窗口之清洁(可用无水乙醇清洗), 毛细管窗口应与机器检测窗口位置的吻合(此点可用毛细管上的Marker位于检测窗边缘来证实)。

9. 毛细管另一端插入电极端，使尖端比电极略低约0.5mm，同时用手指轻轻左右调节毛细管,使之尖端贴近电极尖端(间隔约2毫米)，调好后用胶带固定，合上控温板门。

10. 在Instrument 菜单下执行Autosampler Calibration 命令, 出现Autosampler Calibration 窗口, 根据右下角的提示进行操作。

11. 打开Manual Control, 执行 Syringe Home, 然后选择Syringe Down，输入合适的值并执行，使曲柄几乎与注射器的活塞顶部接触。

12. 具体方法：可先输入较大的值，如200，然后待靠近后，将值减少，如100, 50, 20, 5…。

三.样品准备

1. 将10 X Buffer 稀释到1 X Buffer(需约15ml)。

2. 将1 X Buffer加入到Buffer Reservior 及1号Buffer Vial，注意将液面达到Marker。

3. 2号位为装有约4ml DI H2O的Buffer Vial, 3号位为注入DI H2O的去盖1.5ml eppendorf管。

4. 用适量的TSR溶解测序样品(根据试剂盒的Protocol)，变性，冰上剧冷后，转入专用0.5ml样品管，盖好septa。

5. 于Manual Ctrl中，执行Autosampler HomeX,Y axis和Autosampler Home Z axis 命令。

6. 按Pump Block左边的Tray键，待自动样品盘伸出后将上述样品及试剂放置到相应位置，按Tray退回，关好前门。

四.测序程序的运行

1. 于打开的收集软件之File菜单中选中New。

2. 于跳出的菜单中选Seq. Sample Sheet. 48Tube or 96 Tube，(依Tray的不同而定)

3. 以样品的实际位置为准输入相应的样品名并选择相应的mobility file和instrument file(Matrix file)。

4. 存盘(save) 关掉Sample Sheet。

5. 同上所述再次选New，于眺出菜单中选Seq. Inj List。

6. Seq. Inj List表中，可见Sample Sheet下拉菜单，选中刚才编好的Sample Sheet(有时间及日期显示名)。

7. 在第一个样品前须做一个Test CCD 4-Color程序。具体方法是，用鼠标选中Inj#项的No.1，于Edit 下拉菜单中，选中Insert，有一个空行插入于表的No.1处。任选一个Tube & Sample Name后，于Module下拉菜单处，选Test CCD 4-Color，不选择自动分析即完成。正常情况下4条信号线应在2048(Y轴值)以下，如高于次值则需暂停机器并将毛细管窗口擦净后再继续运行。

8. 编好 Inj List后，存盘(save)(注意Module 的选择)。

9. 选择Run运行此编好 Inj List。

五.测序结果的分析

一般分析软件可对结果进行自动分析, 用户可直接打开Sample file查看测序结果。如果用户想对样品重新分析， 可按以下步骤进行。

1. 双击打开Sequence Analysis 软件，有一个Sample Manager页面弹出。

2. 点一下Add File, 有一个菜单弹出， 找到要分析的原始数据所在的文件夹(位于HD/ABI PRISM 310/RUNS中)，加入需分析的原始数据， 加完后点一下Done。

3. 针对不同的样品的原始数据进行的分析，须注意不同的Dye Set/Primer file, Instrument File的选定。

4. 编好Sample Manager后， 点一下Start开始分析。

5. 双击分析完的Sample File Name, 可得到测序结果。

自动化测序已成为当今基因序列分析的主流，ABI公司出产的310型测序仪是实验室中使用的一种型号。在实际使用中，我们只有注意好Pump Block的清洁及维护、安装毛细管，灌胶细节、样品准备、测序程序的运行、测序结果的分析等细节，才能让此测序仪器更好地为我们服务。