siRNA
互联网
13945
|
siRNA
Small interfering RNA
是一种小RNA分子（~21-25核苷酸），
由Dicer（RNAase Ⅲ家族中对双链RNA具有特异性的酶）加工而成。
SiRNA 是siRISC的主要成员，激发与之互补的目标mRNA的沉默。
越来越多的研究人员开始采用
小分子干扰RNA（small interfering RNAs，siRNAs)
来抑制特定的哺乳动物基因表达。
siRNA 是一种短片断双链RNA分子，
能够以同源互补序列的mRNA为靶目标降解特定的 mRNA，
这个过程就是RNA干扰途径（RNA interference pathway）。
siRNA化学合成
尽管化学合成是最贵的方法，但是却是最方便的——研究人员几乎不需要做什么工作。
主要的缺点包括价格高，定制周期长，特别是有特殊需求的。由于价格比其他方法高，
为一个基因合成3—4对siRNAs 的成本就更高了，
比较常见的做法是用其他方法筛选出最有效的序列再进行化学合成。
最适用于：已经找到最有效的siRNA 的情况下，需要大量siRNA 进行研究 不适用于：筛选siRNA 等长时间的研究，主要原因是价格因素.。
siRNA表达载体
多数的siRNA 表达载体依赖3种RNA聚合酶III 启动子(pol III)中的一种，
操纵一段小的发夹siRNA 在哺乳动物细胞中的表达(1–4)。
这3类启动子包括大家熟悉的人源和鼠源的U6启动子和人H1启动子 。
之所以采用RNA pol III启动子是由于它可以在哺乳动物细胞中表达更多的小分子RNA，
而且它是通过添加一串（3到6个）U来终止转录的。
要使用这类载体，
需要订购2段编码短发夹RNA序列的DNA单链，
退火，克隆到相应载体的pol III 启动子下游。
由于涉及到克隆，这个过程需要几天的时间，
同时也需要经过测序以保证克隆的序列是正确的。
不过幸好载体容易大量扩增，这个优点足以弥补所有缺陷，
特别是当载体在实验中确实有效的时候。
毫无疑问，
siRNA 表达载体的优点在于这是众多方法中唯一可以进行长期研究的方法——
带有抗生素标记的载体可以在细胞中持续抑制靶基因的表达，持续数星期甚至更久。
即使是对转染带有筛选标记质粒的细胞进行瞬时筛选，也有助于富集带质粒的细胞。
这也可以帮助解决一些难转染的细胞由于转染效率低造成的问题。
最近多个厂家开始研究逆转录病毒和其他病毒载体用于siRNA 表达，
其优势在于可以直接高效率感染细胞进行基因沉默的研究 ，
避免由于质粒转染效率低而带来的种种不便。
最适用于：已知一个有效的siRNA 序列，需要维持较长时间的基因沉默，
或者需要用抗生素筛选能表达siRNA 的细胞。长期研究。
不适用于：筛选siRNA 序列
（其实主要是指需要多个克隆和测序等较为费时、繁琐的工作）
|
