X-gal和IPTG，什么时候加到培养基里好？

各位仁兄
        我最近做克隆遇见一个问题，做LB固体培养基的时候，X-gal和IPTG是直接加到培养基面好？还是现用的时候，再涂好？要是加到里面，加多少量较好呢？谢谢

问题补充: (补充时间:2009-11-13 21:29 )
下面的回答中，X-gal的量是我用的量的一半。 若加少了，有什么缺点呢？到底标准是多少呢？谢谢

 

答案1： 说到底，X-gal只是半乳糖苷酶的作用底物,底物的量没有一个确定的值，只要底物的浓度足够显色就可以了，一般在培养基里，X-gal的终浓度是40ug/ml，IPTG的终浓度是24ug/ml，就可以显色，我们把这些直接涂在表面上，就更容易显色了，再多就有点浪费了

答案2：如果你的用量很多，很且急着用的话，做好直接加到培养基中。但若你只需一两个板的话，现用时再加，而且x-gal很贵，我一般是现涂的，每个板x-gal 40ul（20mg/ml）,IPTG 4ul（200mg/ml）。

答案3：一般是配好的amp⁺ LB板，涂板的时候把x-gal 40ul（20mg/ml）,IPTG 4ul（200mg/ml）加入到菌液里，然后混匀涂板。也可以先涂到板上在涂菌。
两者我做的试验都行的。配培养基的时候，一般不直接加x-gal，IPTG，确实存在浪费问题，因为菌只在平板表面长。

答案4：在1小时摇菌以后加在菌液里混匀。X-GAL怕光，注意避免大量光照。在超净台操作时可以将照明灯关掉。我做的蓝白斑筛选菌长得太密了，一般不全涂。取十分之一，和40XGAL和4IPTG混合就行了。如果涂少了的话，蓝斑会不明显。发现蓝斑不明显可以把板放4度半个小时以后颜色会更深一些
 

答案5：在含有适当抗菌素的预制90mm琼脂板中央滴加40ul2%x-gal（20mg/ml）, 7ul20%IPTG（0.8mol/L）上现涂的,涂的时候动作要快，而且要均匀。

(责任编辑：大汉昆仑王)