原理
用抗体筛选λgt11 cDNA文库时，可待噬斑长到一定裎度方可诱导表达融合蛋白，筛选到阳性克隆的成功概率就可能大大增加。噬菌体生长3~4 h 后，将含诱导剂IPTG的滤膜放入噬斑平板，即可诱导β-半乳糖苷酶-cDNA融合蛋白的表达，继续在37℃培养，然后按基本方案用抗体对影印滤膜进行筛选。
材料与仪器
大肠杆菌
IPTG
培养箱 牙签 硝酸纤维素膜
IPTG
培养箱 牙签 硝酸纤维素膜
步骤
1. 用1×104~5×104融合有cDNA的λ噬菌体感染0.5~1.0 ml 过夜培养的Y1090新鲜菌悬液。
2. 加入预热到47℃的7 ml 顶层琼脂中，铺150 mm LB平板，42℃培养3.5 h。
2. 加入预热到47℃的7 ml 顶层琼脂中，铺150 mm LB平板，42℃培养3.5 h。
3. 将132 mm 直径的硝酸纤维素滤膜故入10 mmol/l IPTG溶液中浸泡后，取出干燥。
4. 再将含IPTG的滤膜放入噬菌体文库平板中，37℃培养3.5 h。
5. 每张滤膜作好标记后取出，封闭滤膜上的剩余的蛋白结合位点并进行杂交检测。
4. 再将含IPTG的滤膜放入噬菌体文库平板中，37℃培养3.5 h。
5. 每张滤膜作好标记后取出，封闭滤膜上的剩余的蛋白结合位点并进行杂交检测。
来源：丁香实验
