融合蛋白的免疫筛选实验

蛋白质实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

融合蛋白（fusion protein）有两种不同的含义，一种是通过DNA重组技术得到的两个基因重组后的表达产物。另一种含义就是介导两个细胞质膜融合的一组蛋白，如在仙台病毒脂双层外侧小叶中含有的两种糖蛋白之一，介导病毒被膜与宿主细胞质膜的融合作用。另一种糖蛋白是血细胞凝集素神经酰胺酶。

来源：丁香实验

操作方法

基本方案

1. 在150 ml LB 平板上滴定λgt11 cDNA文库的滴度，宿主菌为大肠杆菌LE392菌株，每个平板使用7 ml 1%LB顶层琼脂。 2. 选择适当的滴度铺平板，于37℃温育8 h。 3. 将直径132 mm 硝酸纤维素滤膜分别编号，放入上述已培养8 h的平板中，于37℃温育过夜。 4. 用针头刺孔并用印度墨汁在每张滤膜上作一标记，然后取出滤膜。 5.

IPTG法

1. 用1×104~5×104融合有cDNA的λ噬菌体感染0.5~1.0 ml 过夜培养的Y1090新鲜菌悬液。 2. 加入预热到47℃的7 ml 顶层琼脂中，铺150 mm LB平板，42℃培养3.5 h。 3. 将132 mm 直径的硝酸纤维素滤膜故入10 mmol/l IPTG溶液中浸泡后，取出干燥。 4. 再将含IPTG的滤膜放入噬菌体文库平板中，3