原理
显色底物 X-gal 可与细菌培养物混合，与溶化的顶层琼脂混合后铺于选择性培养板。
材料与仪器
重组质粒转化的 E.coli
IPTG 溶液 X-gal 溶液
LB 或 YT 琼脂板 LB 或 YT 顶层琼脂 恒温块 木制牙签或接种环
IPTG 溶液 X-gal 溶液
LB 或 YT 琼脂板 LB 或 YT 顶层琼脂 恒温块 木制牙签或接种环
步骤
一、材料
1. 缓冲液和溶剂
IPTG 溶液（20%，m/V）
X-gal 溶液（2%，m/V )
2. 培养基
含有适当抗菌素的 LB 或 YT 琼脂板
LB 或 YT 顶层琼脂
3. 专用设备
可调至 45℃ 的恒温块
木制牙签或接种环
4. 载体和菌种
重组质粒转化的 E.coli。
二、方法
1. 将溶化的顶层琼脂分装于 17X100 mm 试管，将试管置于 45℃ 的加热块槽内备用。
90 mm 培养板用 3 ml 顶层琼脂；150 mm 培养板用 7 ml 顶层琼脂。
2. 从加热块取出第一支试管，快速加入活菌含量不多于 3000 ( 90 mm 培养板）或 10000 ( 150 mm 培养板）的细菌悬液 0.1 ml。盖紧试管盖颠倒数次，以使细菌在琼脂中混匀。
3. 打开试管盖，按表所示加入适量 X-gal 和 IPTG ( 如果需要）。盖紧管盖缓慢颠倒数次混匀内容物。
4. 快速将溶化顶层琼脂倾入含有适当抗菌素的凝固琼脂板的中部，旋转培养板使琼脂散匀。
5. 重复步骤 2~3，完成所有样品的铺板。
6. 于室温使琼脂凝固，擦净培养板盖上的冷凝水，颠倒培养板于 37℃ 培养12~16 h。
7. 取出培养板于 4℃ 放置数小时使菌落显色。
8. 鉴定携带重组质粒的克隆。
携带野生型质粒的克隆含有 β-半乳糖苷酶活性，菌落的中央呈淡蓝色，外周呈深蓝色。
携带重组质粒的克隆无 β-半乳糖苷酶活性，菌落呈奶白色或蛋壳蓝，有时会在菌落中央出现假性蓝斑。
以鲜黄色为背景观察琼腊板可增强眼的辨别蓝色和白色菌落的能力。
9. 筛选和培养携带重组质粒的克隆。
软琼脂中蓝色或白色克隆可在不同方向上形成，时常看起来像是遥远而倾斜的星空，不管其方向性，这些克隆很容易用接种环或牙签通过穿剌琼脂浅层而被挑选出来，并转移至含有适当抗菌素的培养基中。
1. 缓冲液和溶剂
IPTG 溶液（20%，m/V）
X-gal 溶液（2%，m/V )
2. 培养基
含有适当抗菌素的 LB 或 YT 琼脂板
LB 或 YT 顶层琼脂
3. 专用设备
可调至 45℃ 的恒温块
木制牙签或接种环
4. 载体和菌种
重组质粒转化的 E.coli。
二、方法
1. 将溶化的顶层琼脂分装于 17X100 mm 试管，将试管置于 45℃ 的加热块槽内备用。
90 mm 培养板用 3 ml 顶层琼脂；150 mm 培养板用 7 ml 顶层琼脂。
2. 从加热块取出第一支试管，快速加入活菌含量不多于 3000 ( 90 mm 培养板）或 10000 ( 150 mm 培养板）的细菌悬液 0.1 ml。盖紧试管盖颠倒数次，以使细菌在琼脂中混匀。
3. 打开试管盖，按表所示加入适量 X-gal 和 IPTG ( 如果需要）。盖紧管盖缓慢颠倒数次混匀内容物。
4. 快速将溶化顶层琼脂倾入含有适当抗菌素的凝固琼脂板的中部，旋转培养板使琼脂散匀。
5. 重复步骤 2~3，完成所有样品的铺板。
6. 于室温使琼脂凝固，擦净培养板盖上的冷凝水，颠倒培养板于 37℃ 培养12~16 h。
7. 取出培养板于 4℃ 放置数小时使菌落显色。
8. 鉴定携带重组质粒的克隆。
携带野生型质粒的克隆含有 β-半乳糖苷酶活性，菌落的中央呈淡蓝色，外周呈深蓝色。
携带重组质粒的克隆无 β-半乳糖苷酶活性，菌落呈奶白色或蛋壳蓝，有时会在菌落中央出现假性蓝斑。
以鲜黄色为背景观察琼腊板可增强眼的辨别蓝色和白色菌落的能力。
9. 筛选和培养携带重组质粒的克隆。
软琼脂中蓝色或白色克隆可在不同方向上形成，时常看起来像是遥远而倾斜的星空，不管其方向性，这些克隆很容易用接种环或牙签通过穿剌琼脂浅层而被挑选出来，并转移至含有适当抗菌素的培养基中。
来源：丁香实验
