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RT中Olig(dT)15引物与随机引物?

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RT实验Olig(dT)15引物合成的条带明显优于随机引物,不是随机引物的效果较好吗?怎样解释这种现象

网友一回答:

Olig(dT)适合于长链甚至全长mRNA的RT,要求RNA必须有Poly A,所以真核生物的mRNA都适用,对RNA样品的质量要求较高,最好不要有明显的DNA污染、RNA降解和RNA断裂。
随机引物 适合各种RNA的RT,尤其适合短链mRNA和模板丰度很低的情况(比如某个gene表达量很低)。一般建议每5μg总RNA的随机引物的用量为50ng,如果每5μg总RNA的随机引物的用量超过250ng,可能会导致小片段产物(<500bp)的增加和长片断、全长产物的降低。
总的来说,二者各有利弊。最好做预实验时就试验一次,选择最佳的引物。

网友二回答

Olig(dT)适合于长链甚至全长mRNA的RT,要求RNA必须有Poly A,所以真核生物的mRNA都适用,对RNA样品的质量要求较高,最好不要有明显的DNA污染、RNA降解和RNA断裂。
随机引物 适合各种RNA的RT,尤其适合短链mRNA和模板丰度很低的情况(比如某个gene表达量很低)。一般建议每5μg总RNA的随机引物的用量为50ng,如果每5μg总RNA的随机引物的用量超过250ng,可能会导致小片段产物(<500bp)的增加和长片断、全长产物的降低。
总的来说,二者各有利弊。最好做预实验时就试验一次,选择最佳的引物。

(责任编辑:大汉昆仑王)
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