果蝇同工酶的遗传学分析

一、实验原理

同工酶是指那些催化功能相同，而分子构型不同的酶。酶蛋白分子的不同，反映了为它们编码基因的DNA的碱基顺序不同。利用凝胶区带电泳可以将不同的同工酶分离，并利用特异底物染色法使它们在凝胶上显示出迁移率不同的活性区带。这样基因的产物就直接反映出来了。比较亲代与子代的酶带，就可以对控制它们的基因进行遗传分析。如同其他的形态标记，同工酶作为生化遗传标记已广泛应用于基因作图、发育遗传学、群体遗传学、分类学等多个领域。同工酶电泳分析是一种重要而用途广泛的分子生物学方法。

二、实验目的

1.掌握聚丙烯酰胺凝胶电泳分离同工酶的技术

2.了解黑腹果蝇（Drosophilamelanogaster）酯酶同工酶Est-6的遗传方式

3.学习重组值的估计方法

三、实验材料

黑腹果蝇的三个品系：野生型（wildtype）、残翅（vestigialwing）、黑檀体（ebonybodycolor）

四、实验器具和药品

直流稳压电泳仪（VIW-Ⅱ型），垂直平板电泳槽，磨口梨形真空抽气瓶，0.2毫升玻璃匀浆器，50微升微量注射器，离心机（3500转/分），吸管，培养大指管，毛笔，麻醉瓶，小镊子，瓷盘。

试剂 配制：

1.凝胶组成液：

a、Tris-柠檬酸缓冲液：Tris15克、柠檬酸1.25克用蒸馏水溶解，调pH=8.9，定容至1000毫升。

b、丙烯酰胺24克，用a液溶解，定容至100毫升。

c、甲叉双丙烯酰胺0.75克，用a液溶解，定容至100毫升。

d、乙二胺四乙酸二钠0.187克，溶于15毫升a液中。

e、四甲基乙烯二胺原液。

f、过硫酸胺0.4克，溶于10毫升蒸馏水中。

g、丙烯酰胺10克、甲叉双丙烯酰胺2.5克，溶于蒸馏水中，定容至100毫升。

2.电极缓冲液：

Tris6.2克、甘氨酸2克，溶于100毫升蒸馏水中，pH=8.7，用时稀释50倍。

3.样品匀浆液：

蔗糖1.5克，溴酚蓝0.01克，Triton×1000.05克溶于10毫升蒸馏水中。

以上溶液全部放入冰箱，0—4℃保存。f液用新鲜配制的或贮存期二周内的。其他溶液均可贮用二个月。

4.染色缓冲液（0.1mol/L磷酸缓冲液）：

14.2克磷酸氢二钠溶于水中，用2mol/LHCl调pH至

6.5，定容至1000毫升。

5.底物溶液：α-萘乙酸1克、β萘乙酸0.25克，溶于25毫升丙酮内

6.脱色固定液：

水∶甲醇∶冰醋酸=5∶5∶1