常规动物实验模型复制(制作)方法
互联网
2623
一、肿瘤动物模型的建立
将对数生长的肿瘤细胞收集 ， 用无血清基质 10.0ml， 于 1500 转/ 分， 离心3min， 连续洗 3 次， 最后用无血清基质混匀， 用血球计数器计算肿瘤细胞数量( 平均 5 个中方格的细胞计数×104即是肿瘤数/ 毫升) 。 计算完肿瘤细胞总数， 再将 肿瘤细胞密度调至 4×106 个/ml， 每只小鼠腋下接种 50ul(即 2×105个肿瘤细胞)， 2周左右可扪及肿瘤小节结。一般选取 6-8 周的小鼠，不同的肿瘤细胞接种的数量和动物不一样， 比如 LL/2，B 16， Hep 可接种 C57 和 BAL B/C 小鼠， NS-1，EL-4， C26，Meth A 可接种 BAL B/C 小鼠， H22接种昆明鼠。从肿瘤接种后可扪及小结节开始， 每 3 天用游标卡尺量肿瘤纵横大小( 单位：mm)， 至少连续一个月时间。
注意要设计不同的实验组和对照组， 每组动物数一般为 5-10 只， 一般接种肿瘤6-8 周后，小鼠的肿瘤可生长至直径为 15-20mm ( 即小鼠会濒临死亡) 时， 可眼球取血，分离血清并保存血清， 处死小鼠， 取肿瘤组织照相， 取部分肿瘤组织作 冰冻组织切片( 或- 80℃ 保存)， 作相应的免疫组织化学染色 ， 取部分肿瘤组织用3%中性的甲醛固定， 石腊包埋， 作常规HE 染色。
二、神经系统疾病动物模型复制方法
1、脑瘤模型可用甲基胆蒽等化学致癌埋于皮层，或用肿瘤移植的方法复制脑肿瘤。
2、脑卒中模型常用显微手术结扎大鼠、猫、狗的大脑中动脉和将自凝血块注入颈内动脉，引起梗塞。
3、癫痫模型家兔肌肉注射马桑内酯或噪音刺激大鼠等方法常用作复制癫痫模型。
4、脑水肿模型于颈内动脉内注入伤寒内毒素制作急性模型或外力作用引起外伤性脑水肿。
三、消化系统疾病动物模型复制方法
1、病毒性肝炎模型 常用方法是注射乙型肝炎病人血清复制乙型肝炎模型。胆大部分实验动物对甲型肝炎病毒不易感。我国已有报导红面猕猴、恒河猴、人及野生树鼩种毒后出现人甲型肝炎现象。近年来发现某些鸭肝炎病毒的特征与人肝炎病毒十分相似，故用鸭作为人肝炎模型也开始增多。
2、免疫性肝炎模型 慢性或迁延性肝炎患者体内存在着抗肝细胞成分抗体。1959年国外有人用肝组织悬液加弗氏佐剂免疫豚鼠，成功地诱发了肝细胞变性及坏死等病变。也有人报导肝膜蛋白（LSP）加佐剂分次注射产生动物免疫性肝炎模型。
3、胃、肠道溃疡模型 在动物身上复制胃、肠道溃疡的方法较多，但所用的方法不同，引起的溃疡病变也各有特点。常用的方法有：
（1）．应激法 以各种强烈的伤害性刺激（如强迫制动、饥饿、寒冷等），引起动物发生应激性溃疡。如把动物浸入冷水中或放在应激箱中不断地遭受电刺激，使之剧烈不安，一昼液即能引起胃粘膜出血及溃疡。这种方法简单，成功率达99%以上。
（2）．药物法 给动物投服或注射一定量的组织胺、胃泌素、肾上腺类固醇、水杨酸盐、血清素、利血平、保泰松等可造成动物胃肠溃疡。如给豚鼠小剂量的组织胺，连续数天，可引起胃、十二指肠、食道等发生溃疡。又如可用利血平、血清紧张素、阿斯匹林等诱发大白鼠或小白鼠的胃溃疡。
（3）．烧灼法 用电极烧灼胃底部的胃壁，可造成象人的胃溃疡病变；用浓醋酸给大鼠胃壁内注射或涂抹于胃壁浆膜面上可造成慢性溃疡。烧灼法复制胃、肠道溃疡模型的优点是方法简便，溃疡部位可由作者自己选择。
将对数生长的肿瘤细胞收集 ， 用无血清基质 10.0ml， 于 1500 转/ 分， 离心3min， 连续洗 3 次， 最后用无血清基质混匀， 用血球计数器计算肿瘤细胞数量( 平均 5 个中方格的细胞计数×104即是肿瘤数/ 毫升) 。 计算完肿瘤细胞总数， 再将 肿瘤细胞密度调至 4×106 个/ml， 每只小鼠腋下接种 50ul(即 2×105个肿瘤细胞)， 2周左右可扪及肿瘤小节结。一般选取 6-8 周的小鼠，不同的肿瘤细胞接种的数量和动物不一样， 比如 LL/2，B 16， Hep 可接种 C57 和 BAL B/C 小鼠， NS-1，EL-4， C26，Meth A 可接种 BAL B/C 小鼠， H22接种昆明鼠。从肿瘤接种后可扪及小结节开始， 每 3 天用游标卡尺量肿瘤纵横大小( 单位：mm)， 至少连续一个月时间。
注意要设计不同的实验组和对照组， 每组动物数一般为 5-10 只， 一般接种肿瘤6-8 周后，小鼠的肿瘤可生长至直径为 15-20mm ( 即小鼠会濒临死亡) 时， 可眼球取血，分离血清并保存血清， 处死小鼠， 取肿瘤组织照相， 取部分肿瘤组织作 冰冻组织切片( 或- 80℃ 保存)， 作相应的免疫组织化学染色 ， 取部分肿瘤组织用3%中性的甲醛固定， 石腊包埋， 作常规HE 染色。
二、神经系统疾病动物模型复制方法
1、脑瘤模型可用甲基胆蒽等化学致癌埋于皮层，或用肿瘤移植的方法复制脑肿瘤。
2、脑卒中模型常用显微手术结扎大鼠、猫、狗的大脑中动脉和将自凝血块注入颈内动脉，引起梗塞。
3、癫痫模型家兔肌肉注射马桑内酯或噪音刺激大鼠等方法常用作复制癫痫模型。
4、脑水肿模型于颈内动脉内注入伤寒内毒素制作急性模型或外力作用引起外伤性脑水肿。
三、消化系统疾病动物模型复制方法
1、病毒性肝炎模型 常用方法是注射乙型肝炎病人血清复制乙型肝炎模型。胆大部分实验动物对甲型肝炎病毒不易感。我国已有报导红面猕猴、恒河猴、人及野生树鼩种毒后出现人甲型肝炎现象。近年来发现某些鸭肝炎病毒的特征与人肝炎病毒十分相似，故用鸭作为人肝炎模型也开始增多。
2、免疫性肝炎模型 慢性或迁延性肝炎患者体内存在着抗肝细胞成分抗体。1959年国外有人用肝组织悬液加弗氏佐剂免疫豚鼠，成功地诱发了肝细胞变性及坏死等病变。也有人报导肝膜蛋白（LSP）加佐剂分次注射产生动物免疫性肝炎模型。
3、胃、肠道溃疡模型 在动物身上复制胃、肠道溃疡的方法较多，但所用的方法不同，引起的溃疡病变也各有特点。常用的方法有：
（1）．应激法 以各种强烈的伤害性刺激（如强迫制动、饥饿、寒冷等），引起动物发生应激性溃疡。如把动物浸入冷水中或放在应激箱中不断地遭受电刺激，使之剧烈不安，一昼液即能引起胃粘膜出血及溃疡。这种方法简单，成功率达99%以上。
（2）．药物法 给动物投服或注射一定量的组织胺、胃泌素、肾上腺类固醇、水杨酸盐、血清素、利血平、保泰松等可造成动物胃肠溃疡。如给豚鼠小剂量的组织胺，连续数天，可引起胃、十二指肠、食道等发生溃疡。又如可用利血平、血清紧张素、阿斯匹林等诱发大白鼠或小白鼠的胃溃疡。
（3）．烧灼法 用电极烧灼胃底部的胃壁，可造成象人的胃溃疡病变；用浓醋酸给大鼠胃壁内注射或涂抹于胃壁浆膜面上可造成慢性溃疡。烧灼法复制胃、肠道溃疡模型的优点是方法简便，溃疡部位可由作者自己选择。
