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细菌总数测定法

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1708
一、设备和材料
恒温培养箱、恒温水浴槽、试管、移液管、菌落计数器、放大镜、托盘天平、称量纸、培养皿。

二、培养基和 试剂
营养琼脂培养基 0.9%生理盐水

三、检验程序
待检样 适当倍数的稀释液 选择2-3 个适当稀释度各1ml分别加入灭菌平皿内 每皿内加入适量营养琼脂 37℃ 48±2小时 菌落计数→报告

四、操作步骤
1.按无菌操作要求称取样品10g,连同100ml生理盐水加入灭菌三角瓶内,震荡,使成1∶10的均匀供试液。
2.用1ml 灭菌吸管吸取1∶10的供试液 1ml,在离稀释剂液面上约1cm处,沿管壁注入装有9ml 灭菌的盐水管中,混匀即为1∶100的稀释液。
3.另取1ml 灭菌吸管,按上项操作顺序作10倍递增稀释。如此每递增稀释一次,应换用一支1ml灭菌吸管并充分混匀,稀释至10-3 倍数或适当倍数备检。
4.在做上述10倍递增稀释时,每稀释妥一稀释度,即可取1ml稀释液注入9厘米平皿内。(一般可根据对供试品污染情况的估计,从供试液起,选择2-3个适宜稀释度进行测定,每个稀释度各用2-3个平皿)
注:每次吸液时均应将待稀释液充分混匀,充分振荡或用吸管反复吹系数次。
4.稀释液注入平皿后,将熔化并冷至45~50℃的肉汤琼脂培养基倾注平皿内约15mL,转动平皿使充分混合均匀后置水平台待凝。
5.琼脂凝固后,翻转平板,置30-35℃培养箱内培养24h、48h,分别计算平板内生长的菌落,以48小时的菌落数为准。

五、菌落计数方法
先用肉眼观察,点数菌落数(霉菌不包括在内),然后持放大镜检查有无遗漏,各平板菌落计数后,求出同一稀释度各平板生长的平均菌落数,如平板中有连成片状的菌落或在点样菌落蔓延生长时,该平板不宜计数。

六、细菌菌数报告
一般的报告方法是选取同一稀释度平均菌落数在30~300个之间的平板,作为菌落总数测定的范围,其中一个平板有较大片状菌落生长时,或两平板菌落数相差一倍以上,此稀释度不宜采用,稀释度的选择:
1.一个稀释度,平均菌落数在30~300个之间时,乘以稀释倍数报告。
2.两个稀释度,平均菌落数在30~300个之间,则应求出两者总菌数之比,比值小于或等于2应报告平均数,大于2则报告其中较小的数字。
3.有稀释度的平均菌落数均多于300个,应按稀释度最高的平均菌落数,乘以稀释倍数报告。
4.所有稀释度的平均菌落数均少于30个,则按稀释倍数最低的平均菌落数,乘以稀释倍数报告。
5.所有稀释度的平均菌落数均不在30~300之间,其中一个稀释度大于300,而相邻的另一稀释度小于30,则以接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告。
6.有稀释度均无菌生长,报告数为<10个/克。
菌数的报告,菌数在100以内时,按实有数报告之,大于100时,采用左端前2位数字,在前两位数字之后的数值,以四舍五入法计算,数字后面的空,可用10的指数表示。
如供试品经检验细菌数不符合要求,无特殊规定时应重新取样,依法复检两次,按三次结果平均值报告并判定合格与否。( 生物 秀实验频道 www.bbioo.com)
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