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水中细菌总数的测定

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实验五十九 水中细菌总数的测定

  一、目的要求

  1.学习水样的采取方法和水样细菌总数测定的方法。

  2.了解水源水的平板菌落计数的原则。

  二、基本原理

  本实验应用平板计数技术测定水中细菌总数。由于水中细菌种类繁多,它们对营养和其他生长条件的要求差别很大,不可能找到一种培养基在一种条件下,使水中所有的细菌均能生长繁殖,因此,以一定的培养基平板上生长出来的菌落,计算出来的水中细菌总数仅是一种近似值。目前一般是采用普通肉膏蛋白胨琼脂培养基。

  三、器材

  肉膏蛋白胨琼脂培养基,灭菌水;

  灭菌三角烧瓶,灭菌的带玻璃塞瓶,灭菌培养皿,灭菌吸管,灭菌试管等。

  四、操作步骤

  1.水样的采取

  (1)自来水先将自来水龙头用火焰烧灼3分钟灭菌,再开放水龙头使水流5分钟后,以灭菌三角烧瓶接取水样,以待分析。

  (2)池水、河水或湖水应取距水面10—15cm的深层水样,先将灭菌的带玻璃塞瓶,瓶口向下浸入水中,然后翻转过来,除去玻璃塞,水即流入瓶中,盛满后,将瓶塞盖好,再从水中取出,最好立即检查,否则需放入冰箱中保存。

  2.细菌总数测定

  (1)自来水

  (a)用灭菌吸管吸取1ml水样,注入灭菌培养皿中。共做两个平皿。

  (b)分别倾注约15ml已溶化并冷却到45℃左右的肉膏蛋白胨琼脂培养基,并立即在桌上作平面旋摇,使水样与培养基充分混匀。

  (c)另取一空的灭菌培养皿,倾注肉膏蛋白胨琼脂培养基15ml,作空白对照。

  (d)培养基凝固后,倒置于37℃温箱中,培养24小时,进行菌落计数。

   两个平板的平均菌落数即为1ml水样的细菌总数。

  (2)池水、河水或湖水等

  (a)稀释水样取3个灭菌空试管,分别加入9ml灭菌水。取1ml水样注入第一管9ml灭菌水内,摇匀,再自第一管取1ml至下一管灭菌水内,如此稀释到第三管,稀释度分别为10-1 、10-2 与10-3 。稀释倍数看水样污浊程度而定,以培养后平板的菌落数在30—300个之间的稀释度最为合适,若三个稀释度的菌数均多到无法计数或少到无法计数,则需继续稀释或减小稀释倍数。一般中等污秽水样,取10-1 、10-2 、10-3 三个连续稀释度,污秽严重的取10-2 、10-3 、10-4 三个连续稀释度。

  (b)自最后三个稀释度的试管中各取1ml稀释水加入空的灭菌培养皿中,每一稀释度做两个培养皿。

  (c)各倾注15ml已溶化并冷却至45℃左右的肉膏蛋白胨琼脂培养基,立即放在桌上摇匀。

  (d)凝固后倒置于37℃培养箱中培养24小时。

  3.菌落计数方法

  (1)先计算相同稀释度的平均菌落数。若其中一个培养皿有较大片状菌苔生长时,则不应采用,而应以无片状菌苔生长的培养皿作为该稀释度的平均菌落数。若片状菌苔的大小不到培养皿的一半,而其余的一半菌落分布又很均匀时,则可将此一半的菌落数乘2以代表全培养皿的菌落数,然后再计算该稀释度的平均菌落数。

  (2)首先选择平均菌落数在30—300之间的,当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时,则以该平均菌落数乘其稀释倍数即为该水样的细菌总数(见表ⅪⅤ-1,例1)。

  (3)若有两个稀释度的平均菌落数均在30—300之间,则按两者菌落总数之比值来决定。若其比值小于2,应采取两者的平均数;若大于2,则取其中较小的菌落总数(见表ⅪⅤ-1,例2及例3)。

  (4)若所有稀释度的平均菌落数均大于300,则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数(见表ⅪⅤ-1,例4)。

  (5)若所有稀释度的平均菌落数均小于30,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数(见表ⅪⅤ-1,例5)。

  (6)若所有稀释度的平均菌落数均不在30—300之间,则以最近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数(见表ⅪⅤ-1,例6)。

  五、实验报告

  1.结果

  (1)自来水

  (2)池水、河水或湖水等

  2.思考题

  (1)从自来水的细菌总数结果来看,是否合乎饮用水的标准?

  (2)你所测的水源水的污秽程度如何?

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