水中细菌总数的测定

实验五十九 水中细菌总数的测定

　　一、目的要求

　　1．学习水样的采取方法和水样细菌总数测定的方法。

　　2．了解水源水的平板菌落计数的原则。

　　二、基本原理

　　本实验应用平板计数技术测定水中细菌总数。由于水中细菌种类繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有的细菌均能生长繁殖，因此，以一定的培养基平板上生长出来的菌落，计算出来的水中细菌总数仅是一种近似值。目前一般是采用普通肉膏蛋白胨琼脂培养基。

　　三、器材

　　肉膏蛋白胨琼脂培养基，灭菌水；

　　灭菌三角烧瓶，灭菌的带玻璃塞瓶，灭菌培养皿，灭菌吸管，灭菌试管等。

　　四、操作步骤

　　1．水样的采取

　　（1）自来水先将自来水龙头用火焰烧灼3分钟灭菌，再开放水龙头使水流5分钟后，以灭菌三角烧瓶接取水样，以待分析。

　　（2）池水、河水或湖水应取距水面10—15cm的深层水样，先将灭菌的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛满后，将瓶塞盖好，再从水中取出，最好立即检查，否则需放入冰箱中保存。

　　2．细菌总数测定

　　（1）自来水

　　（a）用灭菌吸管吸取1ml水样，注入灭菌培养皿中。共做两个平皿。

　　（b）分别倾注约15ml已溶化并冷却到45℃左右的肉膏蛋白胨琼脂培养基，并立即在桌上作平面旋摇，使水样与培养基充分混匀。

　　（c）另取一空的灭菌培养皿，倾注肉膏蛋白胨琼脂培养基15ml，作空白对照。

　　（d）培养基凝固后，倒置于37℃温箱中，培养24小时，进行菌落计数。

　　 两个平板的平均菌落数即为1ml水样的细菌总数。

　　（2）池水、河水或湖水等

　　（a）稀释水样取3个灭菌空试管，分别加入9ml灭菌水。取1ml水样注入第一管9ml灭菌水内，摇匀，再自第一管取1ml至下一管灭菌水内，如此稀释到第三管，稀释度分别为10^-1 、10^-2 与10^-3 。稀释倍数看水样污浊程度而定，以培养后平板的菌落数在30—300个之间的稀释度最为合适，若三个稀释度的菌数均多到无法计数或少到无法计数，则需继续稀释或减小稀释倍数。一般中等污秽水样，取10^-1 、10^-2 、10^-3 三个连续稀释度，污秽严重的取10^-2 、10^-3 、10^-4 三个连续稀释度。

　　（b）自最后三个稀释度的试管中各取1ml稀释水加入空的灭菌培养皿中，每一稀释度做两个培养皿。

　　（c）各倾注15ml已溶化并冷却至45℃左右的肉膏蛋白胨琼脂培养基，立即放在桌上摇匀。

　　（d）凝固后倒置于37℃培养箱中培养24小时。

　　3．菌落计数方法

　　（1）先计算相同稀释度的平均菌落数。若其中一个培养皿有较大片状菌苔生长时，则不应采用，而应以无片状菌苔生长的培养皿作为该稀释度的平均菌落数。若片状菌苔的大小不到培养皿的一半，而其余的一半菌落分布又很均匀时，则可将此一半的菌落数乘2以代表全培养皿的菌落数，然后再计算该稀释度的平均菌落数。

　　（2）首先选择平均菌落数在30—300之间的，当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，则以该平均菌落数乘其稀释倍数即为该水样的细菌总数（见表ⅪⅤ-1，例1）。

　　（3）若有两个稀释度的平均菌落数均在30—300之间，则按两者菌落总数之比值来决定。若其比值小于2，应采取两者的平均数；若大于2，则取其中较小的菌落总数（见表ⅪⅤ-1，例2及例3）。

　　（4）若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数（见表ⅪⅤ-1，例4）。

　　（5）若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数（见表ⅪⅤ-1，例5）。

　　（6）若所有稀释度的平均菌落数均不在30—300之间，则以最近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数（见表ⅪⅤ-1，例6）。

　　五、实验报告

　　1．结果

　　（1）自来水

　　（2）池水、河水或湖水等

　　2．思考题

　　（1）从自来水的细菌总数结果来看，是否合乎饮用水的标准？

　　（2）你所测的水源水的污秽程度如何？