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细菌的生化反应检测

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不同细菌由于所含的酶系统不完全相同,因而对营养物质的分解能力及代谢产物亦不一致,据此,可用以鉴别细菌的种类。
一、单糖发酵试验
【原理】
单糖发酵是将葡萄糖,乳糖或麦芽糖等分别加入蛋白胨水培养基内,使其最终浓度为0.75~1%。并加入一定量酚红指示剂及小倒管,制成单糖发酵管,接种细菌经37℃培养18~24小时,若能分解糖产酸则酚红指示剂由红变黄,若能分解甲酸有CO 2 和H 2 等气体形成,小倒管内则聚集有气泡;不分解,则指示剂不变色。
【材料】
1.菌种:大肠杆菌,伤寒杆菌18~24小时琼脂斜面培养物。
2.培养基:葡萄糖发酵管,乳糖发酵管等。
【方法】
1.将伤寒杆菌,大肠杆菌按照液体接种方法分别接种于葡萄糖及乳糖发酵管内。
2.置37℃孵箱培养18~24小时。
3.观察结果:由于一些细菌能分解某种糖类产酸,所以培养基中PH下降到7.0以下,在酚红指示剂的显示下,培养基颜色由红变黄。产酸者以“+”表示,如果同时产生气体,则培养基中小倒管内有气泡出现,此乃产酸又产气,以“♁”表示,不分解,则指示剂不变色,用“-”表示。
【结果】
伤寒杆菌大肠杆菌
葡萄糖+♁
乳 糖-♁
二、V-P(Voges-Proskauer)试验
【原理】
有些细菌如产气杆菌,分解葡萄糖产生丙酮酸,丙酮酸脱羧,生成乙酰甲基甲醇,在碱性环境中被氧化为二乙酰,再与培养基内胍基结合,生成红色化合物,V—P试验阳性。
【材料】
1.菌种:大肠杆菌,产气杆菌18~24小时琼脂斜面培养物。
2.培养基:葡萄糖蛋白胨水培养基。
3. 试剂 :V-P 试剂 [40%氢氧化钾水溶液(内含0.3%肌酸)和6%α-奈酚酒精溶液]。
【方法】
1. 分别接种大肠杆菌,产气杆菌于两支葡萄糖蛋白胨水中。
2. 置37℃培养48小时后,取出分别加入KOH1ml和α-奈酚溶液1ml ,摇匀,静置 试管 架上5~15分钟。
3. 观察结果:培养液变为红色为阳性,不变色为阴性。
【结果】

 

 

 

伤寒杆菌

大肠杆菌

葡萄糖

+

乳 糖

-


【原理】
某些细菌如大肠杆菌等分解葡萄糖产生丙酮酸,继而分解为甲酸、乙酸、乳酸等,使培养基PH值降至4.5以下,加入甲基红指示剂呈红色,此为阳性反应;若产酸量少或产生的酸进一步转化为醇、醛、气体和水等,则培养基的酸碱度仍在PH 6.2以上,加入甲基红指示剂呈现黄色,为阴性反应。
【材料】
1. 菌种:大肠杆菌,产气杆菌18~24小时琼脂斜面培养物。
2. 培养基:葡萄糖蛋白胨水培养基。
3. 试剂:甲基红试剂。

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