细菌的生化反应检测

不同细菌由于所含的酶系统不完全相同，因而对营养物质的分解能力及代谢产物亦不一致，据此，可用以鉴别细菌的种类。
一、单糖发酵试验
【原理】
单糖发酵是将葡萄糖，乳糖或麦芽糖等分别加入蛋白胨水培养基内，使其最终浓度为0.75~1％。并加入一定量酚红指示剂及小倒管，制成单糖发酵管，接种细菌经37℃培养18~24小时，若能分解糖产酸则酚红指示剂由红变黄，若能分解甲酸有CO ₂ 和H ₂ 等气体形成，小倒管内则聚集有气泡；不分解，则指示剂不变色。
【材料】
1．菌种：大肠杆菌，伤寒杆菌18~24小时琼脂斜面培养物。
2．培养基：葡萄糖发酵管，乳糖发酵管等。
【方法】
1．将伤寒杆菌，大肠杆菌按照液体接种方法分别接种于葡萄糖及乳糖发酵管内。
2．置37℃孵箱培养18~24小时。
3．观察结果：由于一些细菌能分解某种糖类产酸，所以培养基中PH下降到7.0以下，在酚红指示剂的显示下，培养基颜色由红变黄。产酸者以“+”表示，如果同时产生气体，则培养基中小倒管内有气泡出现，此乃产酸又产气，以“♁”表示，不分解，则指示剂不变色，用“-”表示。
【结果】
伤寒杆菌大肠杆菌
葡萄糖+♁
乳 糖-♁
二、V-P(Voges-Proskauer)试验
【原理】
有些细菌如产气杆菌，分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸脱羧，生成乙酰甲基甲醇，在碱性环境中被氧化为二乙酰，再与培养基内胍基结合，生成红色化合物，V—P试验阳性。
【材料】
1．菌种：大肠杆菌，产气杆菌18~24小时琼脂斜面培养物。
2．培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基。
3． 试剂 ：V-P 试剂 [40％氢氧化钾水溶液(内含0.3％肌酸)和6%α-奈酚酒精溶液]。
【方法】
1. 分别接种大肠杆菌，产气杆菌于两支葡萄糖蛋白胨水中。
2. 置37℃培养48小时后，取出分别加入KOH1ml和α-奈酚溶液1ml ,摇匀，静置 试管 架上5~15分钟。
3. 观察结果：培养液变为红色为阳性，不变色为阴性。
【结果】

 

	伤寒杆菌	大肠杆菌
葡萄糖	+	♁
乳 糖	-	♁

【原理】
某些细菌如大肠杆菌等分解葡萄糖产生丙酮酸，继而分解为甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基PH值降至4.5以下，加入甲基红指示剂呈红色，此为阳性反应；若产酸量少或产生的酸进一步转化为醇、醛、气体和水等，则培养基的酸碱度仍在PH 6.2以上，加入甲基红指示剂呈现黄色，为阴性反应。
【材料】
1. 菌种：大肠杆菌，产气杆菌18~24小时琼脂斜面培养物。
2. 培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基。
3. 试剂：甲基红试剂。