果蝇唾腺染色体玻片标本的制作及观察

一、实验目的
１、了解果蝇唾液腺染色体的形态学及遗传学特征。
２、学习分离果蝇幼虫唾液腺的技术，掌握唾液腺染色体的制片方法。
二、实验原理
        唾液腺染色体是一类存在于双翅目昆虫（果蝇、摇蚊）幼虫唾液腺细胞中的巨大染色体。双翅目昆虫的唾液腺细胞发育到一定阶段之后就不再进行有丝分裂，而永久停留在分裂间期。随着幼虫的生长，唾液腺染色体仍然不断的进行自我复制而不分开，经过许多次的复制形成的1000－4000拷贝的染色体丝，合起来直径达5微米，长度达400微米，比普通细胞中期染色体约大100－150倍，所以又称为多线染色体或巨大染色体。体细胞中同源染色体处于紧密配对状态，这种状态称为“体细胞联会”。在以后不断的复制中仍然不分开，由此成千上万条核蛋白纤维丝（染色质丝）结合在一起，紧密盘绕。所以细胞中染色体只成单倍数。唾液腺染色体经过染色后，呈现深浅不同、疏密各异的横纹。
三、实验材料
果蝇三龄幼虫
四、器具及药品
显微镜，双筒解剖镜，解剖器，载玻片，盖玻片，滤纸，生理盐水，醋酸洋红。
五、实验步骤
1、三龄幼虫的饲养
只有使用发育良好的肥大的幼虫才能获得满意的制片效果。这种饲养方法很讲究，一般遵循以下原则：⑴培养基富含营养，可用下述配方，玉米粉100g，红糖130g，琼脂10g，苯甲酸0.75g，丙酸3ml，酵母粉20g， 蒸馏 水1.2L。⑵幼虫密度要小，每一培养瓶一般3对果蝇即可，并在24小时清除成虫。⑶低温培养，18-20℃条件下培养。
2、剥取唾液腺
     将载玻片置于双筒解剖镜下，并在载玻片上滴加生理盐水1滴，取三龄幼虫放在其中，将培养基洗掉，另取一载玻片滴上生理盐水1滴，将洗好的三龄幼虫转入其中，两手各握一枚解剖针，左手的解剖针压住幼虫后端1/3处，固定幼虫，右手的解剖针按住幼虫头部，用力向右拉，把头部从身体拉开，唾腺随之而出，唾腺是一对半透明的棒状腺体，形似香蕉。将周围的其他组织剔除。
3、染色与压片
将生理盐水吸干，滴上醋酸洋红染色液，染色20分钟。盖上盖玻片，用镊子轻敲盖玻片，从中间向四周，再用 滤纸 轻轻压一下，吸去多余的染液，左手压住盖玻片左下角，右手大拇指朝一个方向用力压盖玻片即可。
4、镜检