植物过氧化物同工酶材料的提取

一、实验目的
    1、掌握植物同工酶实验技术，了解植物同工酶分析在遗传研究中的作用。
2、掌握过氧化物同工酶的提取方法。
二、实验原理
    同工酶指作用于底物相似或完全相同的酶的不同分子形式，即催化同一种反应而结构不同的一簇酶，它们是受遗传决定的酶的不同分子形式。是 生物 体代谢的调节者，与特殊的生理功能和细胞分化相联系，并且与基因进化及种的演变有着密切的关系，表现出明显的组织、种属和发育的特异性。利用凝胶电泳技术可以比较种属同工酶的差异并将它们分开，用专一的作用底物和特殊染料，把需要分析的酶染色，在凝胶上呈现同工酶谱。
三、实验材料
同属的植物叶片
四、器具及药品
天子天平，冷冻离心机，冰箱，冷冻匀浆机，可调移液器，解剖器，漏斗，纱布， 离心管 ，研钵，蔗糖，溴酚兰，石英砂，聚乙烯吡咯烷酮（PVP），巯基乙醇，三羟甲基氨基甲烷，盐酸。
五、实验步骤
1、预冷研钵、漏斗、 离心管 、纱布等器具。
2、配制提取缓冲液
Tris-HCl缓冲液配制：Tris6.057g，加水溶解，用浓盐酸调PH至7.5，定容至500ml，过滤储存。
25ml 0.1mol/l的PH7.5的磷酸缓冲液或Tris-HCl缓冲液；1.25g蔗糖；0.025 ml巯基乙醇。即称蔗糖2.5g加入50ml 0.1mol/l PH7.5的磷酸缓冲液中，研磨前加入0.050ml巯基乙醇（0.1％ v/v，0.014mol/l）。
3、研磨
将预冷的研钵拿出放冰浴中，每一研钵中加少量石英砂、聚乙烯吡咯烷酮，将需研磨的材料剪碎于研钵中，加提取缓冲液1ml，研磨成匀浆，再加4ml提取缓冲液，继续研磨2分钟。
4、离心
将研磨材料用漏斗、纱布过滤于1.5ml离心管内，写上标签。平衡后对称放入冷冻 离心机 内，15000rmp/min离心20分钟。
5、分装保存
     取上清液加入等体积的40％的蔗糖，1-2滴1％溴酚蓝，混匀后分成3瓶，贴上标签，-20℃保存。