应用EL-4 CTLL检测IL-1生物学活性

　　㈠ 原理：小鼠胸腺瘤细胞系EL4的某些亚克隆细胞表面具有高密度IL-1受体，在IL-1诱导下产生高水平的IL-2，通过用IL-2依赖株CTLL-2检测IL-2的生物学活性，从而反映检测样品中IL-1的水平。
　　㈡ 操作步骤：  免疫学实验技术论坛   http://bbs.bbioo.com/forum-140-1.html
　　　 1. 用EL４细胞两步法检测IL-1活性：
　　　　　　　　收集处于对数生长期的EL４细胞
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　　　　　　　洗涤后，用1％FCS RPMI1640重悬细胞，并
　　　　　　　　　　　调整细胞浓度2×10６/ml，
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　　　　　　　　　　加处96孔板中，100μl/孔
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　　　　　　　　加入不同稀释度的IL-1α或IL-1β，100μl/孔，
　　　　　　　　　　　同时设1％FCS RPMI 1640对照
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　　　　　　　　　　　5％CO,37℃培养18～24小时
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　　　　　　　　按终稀释度为1∶10～20转入另一块96孔板中
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　　　　　　　用CTLL-2 检测IL-2活性、检测方法见"IL-2检测"

2. 用EL4细胞一步法检测IL-1活性
　　　　　　　　用5％FCS RPMI 1640调整
　　　　　　　　EL4细胞浓度至2×10５/ml，CTTL-2浓度至4×10５/ml
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　　　　　　　　　　　　加入96孔板中，两种细胞各加50μl/孔
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　　　　　　　　　　　　加入不同稀释度的IL-1或待测样品，同
　　　　　　　　　　　　　时设EL４和CTLL-2细胞对照
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　　　　　　　　　　　置5％CO２,37℃培养24～28小时后加入
　　　　　　　　３H-TdR,0.5μci/50μl/孔,继续培养6～8小时
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收集样品，β计数

　　㈢ 试剂 和器材
　　 1. EL４细胞
　　 2. CTLL-2细胞
　　 3. 标准rIL-1。
　　 4. ３H-TdR、POPOP、PPO、二甲苯。
　　 5. 玻璃纤维滤纸，细胞收集仪。
　　 6. β计数仪
　　 7. 96孔板，无菌吸管，滴管、 试管 及加样器头。
　　 8. FCS,RPMI 1640,CO２培养箱等。
　　㈣ 注意事项：
　　1. 在一步法检测IL-1时，其EL４细胞浓度不宜超过1×10４/孔， 血清 终浓度应＜5％。
　　2. 在二步法检测IL-1时，其EL４细胞浓度在2×10５/孔时，犉d转移上清稀释度不宜低于1∶8,其诱导时间应12～24小时间为佳。诱导 血清 浓度应≤1％。
　　3. 在检测经诱导的上清中IL-1时，应避免使用A23187，TPA和ConA等较强的能诱导EL４细胞产生IL-2的诱导剂来刺激IL-1的产生。