丁香实验_LOGO
登录
提问
我要登录
|免费注册
点赞
收藏
wx-share
分享

直接凝集反应(agglutination)

互联网

3753
某些病原微生物或红细胞悬液等颗粒性抗原与相应抗体结合,在有适量电解质存在下,经过一定时间出现肉眼可见的凝集小块,称为凝集反应(agglutination)。
根据反应的方式不同,凝集反应可分为直接凝集反应、间接凝集反应和抗球蛋白试验等。直接凝集反应时颗粒性抗原和相应抗体直接结合,在有电解质存在的条件下,出现肉眼可见的凝集小块,为直接凝集反应。有玻片凝集法和试管凝集法。前者是一种定性实验,多用已知诊断血清检验未知抗原和进行细菌分型,也可以用来鉴定人类红细胞ABO血型;后者是一种半定量试验,用于鉴定被检者血清中有无某些病原菌的抗体及其含量,以协助临床诊断或供流行病学调查研究。本节将通过玻片凝集法和试管凝集法详细介绍直接凝集反应。
   (一)玻片凝集试验
   (1)取洁净载玻片1片,一端滴生理盐水1滴作为对照,另一端滴加诊断血清1滴。
   (2)用接种环取分离好的病原菌,于生理盐水中和诊断血清中分别混匀(注意不可先涂血清后涂盐水以免发生误差)。
   (3)室温静置数分钟。如果抗原抗体相对应出现阳性反应,则诊断血清中出凝集块,而盐水侧则为均匀的乳白色。否则为阴性反应。
   (二)试管凝集反应
   (1)排列洁净干燥 试管 8支于 试管 架上。
   (2)用吸管吸取生理盐水,分别加0.5ml于各试管中。吸取10倍稀释的被检血清,加0.5ml于第一管中。
   (3)自第一管开始稀释,使充分混合,然后吸出0.5ml放入第二管,依次稀释至第七管,在从第七管内吸出0.5ml弃去。第一管至第七管血清稀释度为1∶20,1∶40,1∶80,1∶160,  1∶320,1∶640;1∶1280。第八管不加血清,作为对照。
   (4)吸取诊断菌液,每管加0.5ml(加菌液时由对照管向前依次加入),此时每管内的血清稀释度又增加一倍。其操作程序见表15-1。
   (5)摇匀后,放37℃温箱18~24h或37℃ 水浴 箱4h后观察结果。观察结果时先观察对照管,再观察各试验管。注意观察凝集颗粒的松软、大小、均匀度等性状以及液体的混浊程度。若液体仍呈均匀混浊或经振摇后呈混浊者为阴性结果;上部液体较清亮,同时管底有凝集块者为阳性反应。阳性反应者可根据下面标准确定凝集的强弱。
   ++++ : 完全凝集、上清液澄清。
   +++  :大部凝集、上清液微混。
   ++  :中等凝集、上层液较混浊。
   +  :少量凝集、上层液混浊。
   -  :无凝集、菌液混浊。
   记录结果后判定效价(又称滴度)。凝集效价是指能发生中等凝集(++)现象的最高 血清 稀释度。
提问
扫一扫
丁香实验小程序二维码
实验小助手
丁香实验公众号二维码
扫码领资料
反馈
TOP
打开小程序