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去污剂对红血球细胞膜稳定性的影响

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目的和要求
1.了解各种去污剂对红血球细胞膜稳定性的影响
2 .学会制备红血球细胞

原理
多种去污剂可以溶解细胞膜上的磷脂化合物,从而使细胞膜破裂,释放出细胞内物质。
血红蛋白在540nm有特异吸收峰。去污剂作用后的无细胞膜溶液于540nm处的A值大小可以表示其红血球细胞对不同去污剂的敏感性。

步骤
1.红血球等渗溶液的制备
取已加抗凝剂的猪血2.5mL,加生理盐水10.0mL,离心20方针(2000rpm),收集沉下的红血球,用生理盐水洗涤一次(5mL),再离心20分钟(2500rpm),收集沉淀,加10mL生理盐水,悬浮红血球,即为红血球等渗溶液,备用。
2.取4支 试管 各加0.2mL红血球等渗溶液,分别对应加入10.0g/L的Triton X-100,Brij58,CTAB,SDS 5mL,小心混匀,2500rpm离心20分钟,收集上清液,测540nm的A值(以相同操作,不含红血球的去污剂作参比)。
以Triton X-100的A值作为100%的溶解作用,计算其它去污剂的相对溶解作用。
3.不同浓度的中性去污剂对细胞膜的溶解作用
取6支 试管 ,各加生理盐水5mL,红血球等渗液1.0mL,向各管对应加入10.0g/L、8.0g/L、6.0g/L、4.0g/L、2.0g/L、1.0g/L的Triton X-100 50Ul,小心混匀,置于37度恒温 水浴 中20分钟,2500rpm离心20分钟,取上清液于540nm处测吸收值,计算相对溶解作用(参比液:5.0mL生理盐水+50uL不同浓度的Triton X-100)。
以Triton X-100的不同浓度为X轴,相对溶解作用为Y轴,作图。
4 .计算公式
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